當往某些溶液中加入一定量的酸和堿，或加少量水稀釋時，這類溶液的pH值基本保持不變，我們稱這樣的溶液叫做緩沖液，它在生物化學(xué)的研究工作中有著極為重要的意義。

三羥甲基氨基甲烷（Tris）是一種應(yīng)用廣泛的有機物，化學(xué)式為C4H11NO3，白色結(jié)晶顆粒。Tris及其衍生物常用于生物學(xué)實驗中緩沖液的制備，制作藥物等，尤其蛋白質(zhì)及核酸相關(guān)的實驗中都需要用Tris作為生物緩沖劑。

優(yōu)點

1、 Tris為弱堿，只用這一種緩沖體系可配制由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液；

2、對實驗結(jié)果干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。

PH范圍

室溫（25℃）下，緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。

一般加入鹽酸/氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至所需值，同時應(yīng)注意溫度的影響。

Tris緩沖液：pH=7.5~9.0；

Tris-HCl緩沖液：pH＝7.5~8.5；

Tris-磷酸鹽緩沖液：pH＝5.0~9.0。

Tris緩沖液

一、TBS緩沖液

TBS緩沖液是Tris-HCl緩沖鹽溶液，為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液。

一般為10mmol/L Tris含0.9%NaCl，用1N HCl調(diào)pH至7.4，多為貯存液，作為洗膜緩沖液時加Tween配制為TBST。

緩沖液的pH值易受溶液濃度和溫度影響，且易吸收空氣中的CO2，所以配制好的緩沖液要密封保存。此緩沖液會干擾某些pH電極，所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。

二、TBST緩沖液

TBST是TBS＋Tween的縮寫，含有Tris-HCl，NaCl，Tween20，是做Western Blot常用的一種洗膜緩沖液。WB實驗中，為了防止曝光圖背景太高，在孵育時，混有Tween 的TBST 能洗掉PVDF膜上非特異性吸附的蛋白質(zhì)。Tween是一種離子表面活性劑，有復(fù)性抗原作用，可提高抗體特異性結(jié)合。TBST緩沖液于室溫儲存，若溫度過低，會產(chǎn)生沉淀，可溶解或加熱后使用。

三、TE緩沖液

TE緩沖液是Tris-HCl緩沖液 +EDTA，一般用作溶解劑或保持劑，主要是調(diào)控PH，常被用于核酸電泳。TE緩沖液是弱堿性，對DNA的堿基有保護作用，因此，DNA在TE中的穩(wěn)定性較好，不易被破壞完整性或產(chǎn)生開環(huán)及斷裂，TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲存。

四、TAE緩沖液

TAE緩沖液是將TE緩沖液中的鹽酸換成乙酸（Tris/Acetate/EDTA）。

TAE是使用最廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質(zhì)量，且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較快，電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果，此外，回收DNA片段時也易用TAE緩沖系統(tǒng)進行電泳。但是，TAE的缺點是緩沖容量小，長時間電泳不可用，除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換。

五、TBE緩沖液

TBE緩沖液是將TE緩沖液中的鹽酸換成硼酸（Tris/Borate/EDTA）。

TBE緩沖液常用于丙烯酰胺實驗以及瓊脂糖凝膠電泳。TBE Buffer為無色澄清液體，可在室溫中儲存，25℃時的pH值為8.2~8.4。在使用時要注意的是TBE Buffer中不能含有DNA水解酶和RNA水解酶。TBE可用于長時間電泳，但是，超螺旋在TBE緩沖液中電泳時測出的相對分子質(zhì)量會稍大于實際分子質(zhì)量。