背景技術(shù)

恩替卡韋一水合物（Entecavir)，化學(xué)名為2_氨基_9_[ (1S，3R，4S) _4_羥基-3-羥甲基-2-亞甲基環(huán)戊烷]-1，9- 二氫-6H-嘌呤-6酮一水合物，是由百時(shí)美施貴寶公司（Bristol -Myers Squibb)自主研發(fā)的一類環(huán)戊烷鳥苷類似物，系乙肝病毒抑制劑。 本品已于2005年3月獲得美國食品藥品管理局（FDA)上市批準(zhǔn)，其片劑商品名為博路定 (BaraclUde)，2006年初在中國全面上市。適用于病毒復(fù)制活躍、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT) 持續(xù)升高或有肝臟組織學(xué)顯示活動(dòng)性病變的成人慢性乙型肝炎患者。

恩替卡韋是一種強(qiáng)效選擇性鳥嘌呤核苷類似物，具有顯著的抗乙型肝炎病毒HBV 的活性。臨床研究證實(shí)，恩替卡韋較拉米夫定具有更加顯著的病毒抑制作用，幾乎沒有副作用，且耐藥性很低，在治療慢性乙型肝炎藥物中被認(rèn)為有很好的臨床應(yīng)用用前景。

恩替卡韋是一種能有效抑制乙肝病毒復(fù)制的脫氧鳥嗓吟核奮類似物，對(duì)肝臟病毒的復(fù)制從起始階段、逆轉(zhuǎn)錄期和DNA合成期的三個(gè)階段起抑制作用。在離體肝細(xì)胞的研究中，恩替卡韋能定向?yàn)楦渭?xì)胞吸收并磷酸化成一、二、三磷酸酯，其1?25 μ mol/L時(shí)在肝臟的吸收成線性相關(guān)，半衰期為15小時(shí)。與其它核苷類化合物如拉米夫定、阿德福韋、泛昔洛韋等相比較，恩替卡韋能更有效地磷酸酯化，這或許正是其具有更高抗HBV活性的原因之一。恩替卡韋在細(xì)胞內(nèi)易被細(xì)胞酶逐步磷酸化為其活性代謝物恩替卡韋三磷酸（ETV-TP)， 后者為HBV DNA的復(fù)制。恩替卡韋抑制HBV復(fù)制活性最強(qiáng)，IC50為0. 00375 μ mol/L,抑制細(xì)胞的毒性CC5tl為30 μ mol/L,治療指數(shù)（IC5(1/CC5(1)高達(dá)8000。其在DHBv感染的鴨肝細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)抑制DHBv復(fù)制的IC5tl為0. 00013 μ mol/L,比拉米夫定高1000倍，兩者在細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)顯示抗HBV相加作用。在WHV感染的土撥鼠肝炎模型及DHBV感染的鴨肝炎模型中，恩替卡韋均顯示顯著的抗兩種肝炎病毒的治療活性。

總之，恩替卡韋不僅有很強(qiáng)的抗HBV的能力，而且長期應(yīng)用耐藥發(fā)生率較低，同時(shí)還具有劑量小的優(yōu)點(diǎn)。固此恩替卡韋的研制開發(fā)必然會(huì)給無數(shù)慢性HBV患者帶來福音，必然會(huì)為HBV的治療帶來新的希望，將具有極其重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)效益。

本品為白色或類白色結(jié)晶粉末，無臭，在二甲基甲酰胺中溶解，甲醇中略溶，乙醇和水中微溶，在乙腈或丙醇中幾乎不溶，熔點(diǎn)238?M0°C (分解），密度為1.81，恩替卡韋一水合物.

該路線以雙環(huán)戊二烯為原料，經(jīng)過11步得到恩替卡韋一水合物，操作復(fù)雜，對(duì)人員素質(zhì)要求極高，同時(shí)收率極低，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，提供一種工藝生產(chǎn)簡(jiǎn)單、產(chǎn)品收率大幅度提高的工業(yè)化生產(chǎn)工藝。本發(fā)明工藝具有成本低廉、污染小、工藝穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明的技術(shù)工藝如下：

反應(yīng)步驟為：

a、l的制備

配有短分餾柱（可加入填料)的常壓蒸餾裝置，接受瓶中加入無水氯化鈣，并置于冰水浴中（單體環(huán)戊二烯室溫聚合，須低溫保存），尾接管有干燥塔。向三口瓶中加入雙環(huán)戊二烯，整個(gè)系統(tǒng)微氮?dú)獗Ｗo(hù)，在攪拌下緩慢升溫至180°C，保持蒸餾上氣口溫度不超過 42 0C，最終得單體環(huán)戊二烯（低溫保存）。

b、2的制備

向反應(yīng)釜中加入無水二甲苯，去氧化表面金屬鈉，微氮?dú)獗Ｗo(hù)，攪拌下升溫至 120?150°C，鈉溶解，劇烈攪拌，使鈉分散成鈉沙，停止攪拌，使體系恢復(fù)到室溫，鈉沙固化，抽去表面二甲苯，用適量無水THF置換三次，最后加入無水THF保護(hù)，備用。

在微氮?dú)獗Ｗo(hù)下，用冰水浴將四氫呋喃-鈉沙降溫O?10°C，將制備好的單體環(huán)戊二烯緩慢滴加到四氫呋喃-鈉沙體系中，控制溫度不超過10°c，滴加畢，撤去冰水浴，自然升溫至室溫并攪拌約3小時(shí)，鈉沙基本消耗完，最終得淡紅色環(huán)戊二烯鈉溶液。

C、3 的制備：

將二甲基苯基氯硅烷和無水四氫呋喃加入到反應(yīng)釜中，微氮?dú)獗Ｗo(hù)下，使體系冷卻到-70°C以下，開始滴加2，控制滴加溫度在-70°C以下，滴加畢，在-70°C以下保溫?cái)嚢杓s 3小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完全，，使其自然升溫至0°C，緩慢加入冰水，攪拌，靜置分層，有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，正己烷萃取，，無水硫酸鈉干燥，65°C下減壓濃縮，最后得深黃色油狀物3。

d、4 的制備：

將加入3和正己烷的反應(yīng)釜冷卻到-10°C，快速將二氯乙酰氯滴加其中，繼續(xù)攪拌，將三乙胺和正己烷的混合液緩慢滴加到體系中，溫度保持在_5°C以下，滴加畢，在0? 4°C反應(yīng)約4小時(shí)，然后自然升溫至室溫8?10小時(shí)（過夜）。TLC檢測(cè)反應(yīng)完畢。加入水，室溫?cái)嚢?0分鐘，靜置分層，正己烷萃取，合并有機(jī)層，用飽和碳酸氫鈉洗滌至中性，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，得深色油狀物4。

e、5的制備

室溫下將4，甲醇，水和三乙胺加入到反應(yīng)釜中，攪拌均勻。升溫至75-80°C，反應(yīng) 4?5小時(shí)，反應(yīng)畢，將體系冷卻到10°C以下，分批加入碳酸鉀，攪拌30分鐘，緩慢加入硼氫化鈉（注意噴料），緩慢升至室溫?cái)嚢?-10小時(shí)，使反應(yīng)完全。此時(shí)反應(yīng)體系PH = 9-10. 向體系中加入水，淬滅反應(yīng)，攪拌0. 5小時(shí)，用濃鹽酸將體系調(diào)有到PH = 2-3，加乙酸乙酯萃取，分出有機(jī)相，飽和食鹽水洗滌，合并有機(jī)相無水硫酸鈉干燥，抽濾，濃縮，得黑色粘稠5.

f、6 的制備：

分別將5、無水乙醇和左旋精制氨基物加入反應(yīng)釜中，室攪拌約1小時(shí)，有晶體析出，升溫至50-60°C，攪拌5-6小時(shí)，降至室溫?cái)嚢杓s3小時(shí)，過濾，濾餅用少量無水乙醇洗滌，濾餅55 °C下減壓干燥10小時(shí)，得5淺棕色粉末固體。（HPLC彡93 % )。

g、7 的制備：

室溫下向干燥的反應(yīng)釜中加入甲醇和6，冰鹽水浴下，滴加濃硫酸，控制溫度在 5°C以下，加完后，自然升溫到室溫（約20-30°C )，攪拌反應(yīng)10小時(shí)。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。 反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸除甲醇溫度< 50°C (過程中，嚴(yán)格控制真空度和溫度，速度要快），蒸干后，冷卻到室溫。加入乙酸乙酯和水，攪拌5分鐘后，用分液漏斗萃取，下面水層再用乙酸乙酯萃取，（水層放入收廢水集池）合并有機(jī)層，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)PH到8-9。如果乳化用布氏漏斗過濾，（在漏斗上加一層硅藻土），濾液用分液漏斗分去水，上層有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌兩次，再用無水硫酸鈉干燥，過濾除去固體硫酸鈉。減壓濃縮有機(jī)相溫度 (50°C，，得黑色產(chǎn)物為7。

h、8 的制備：

室溫下將7，甲醇和水加入到反應(yīng)釜中，攪拌均勻。升溫至75_80°C，反應(yīng)3?4小時(shí)，反應(yīng)畢，將體系冷卻到10°c以下，緩慢加入還原劑，緩慢升至室溫?cái)嚢??7小時(shí)，使反應(yīng)完全。向體系中加入水，淬滅反應(yīng)，攪拌0. 5小時(shí)，用濃鹽酸將體系調(diào)節(jié)到PH = 5?6，加乙酸乙酯萃取，分出有機(jī)相，飽和食鹽水洗滌，合并有機(jī)相無水硫酸鈉干燥，抽濾，濃縮，得淺紅色粘稠8。

i、9的制備

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向干燥的反應(yīng)釜中加入冰醋酸和8，攪拌溶解后，加入乙酸三氟化硼，加熱升溫反應(yīng)5?15小時(shí)，溶液變?yōu)楹谏?，反?yīng)畢，冷卻到室溫。向反應(yīng)瓶中加入甲醇， 冰浴下，用5N氫氧化鉀溶液調(diào)PH到7?9，此時(shí)為黃色乳狀物，再緩慢滴加30%過氧化氫溶液，加畢，撤去冰水浴，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加熱升溫到70°C保溫反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完成后， 冷卻到室溫，分批滴加飽和亞硫酸氫鈉溶液.加完后攪拌半小時(shí)，然后減壓回收甲醇溫度 60°C左右（注意噴料，蒸餾速度不可太快，濃縮甲醇時(shí)有大量泡沫產(chǎn)生）殘留物冷卻到室溫后，用冰鹽浴冷到0°C，用濃鹽酸調(diào)PH到2，為黃色液體。向反應(yīng)瓶中加入乙酸乙酯，攪拌5 分鐘后，萃取出乙酸乙酯（可回收套用），若乳化嚴(yán)重，可加少許丙酮，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，濃縮即得淺黃色油狀液體9。

j、10 的制備

9在酮的作用下形成縮酮而得10。

k、11 的制備

室溫下向干燥的反應(yīng)釜中依次加入3A分子篩和干燥的二氯甲烷，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下， 將反應(yīng)液冷卻到_25°C左右，滴加（-)-DIPT，滴完，控溫在-25°C左右攪拌反應(yīng)20分鐘。然后滴加Ti(i-oft04，滴完，控溫在-25°C左右攪拌反應(yīng)20分鐘；接著滴加10和二氯甲烷的混合溶液，滴完，控溫在_25°C左右攪拌反應(yīng)20分鐘；然后滴加TBHP溶液，滴完，控溫在_25°C左右繼續(xù)攪拌反應(yīng)，用TLC監(jiān)控反應(yīng)。展開劑=石油醚：乙酸乙酯=2 ： 1(約4小時(shí)反應(yīng)結(jié)束，此反應(yīng)要求嚴(yán)格無水，否則反應(yīng)不完全）反應(yīng)完成后，滴加亞硫酸氫鈉水溶液，控制內(nèi)溫不超過-10°C，加完后，拆去冷卻浴，升溫到室溫Q0-25°C )攪拌反應(yīng)1小時(shí)。抽濾，（在漏斗上加一層硅藻土），濾液加水，攪拌振勻后，萃取，上面水層用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌兩次，萃取出的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，過濾除去固體硫酸鈉。減壓濃縮有機(jī)相溫度45 < °C，得25g淡棕色油狀物為11。

l、12 的制備：

室溫下向反應(yīng)釜中依次加入2-氨基-6-芐氧鳥嘌呤，一水合氫氧化鋰和DMF，通氮?dú)獗Ｗo(hù)下，升溫到90°C，攪拌反應(yīng)，約16小時(shí)反應(yīng)結(jié)束。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。展開劑=石油醚：乙酸乙酯=2 ： 3。加入乙酸乙酯和飽和食鹽水，攪拌5分鐘后，過濾，（在漏斗上加一層硅藻土），濾液轉(zhuǎn)入分液漏斗萃取，下面水層再用乙酸乙酯萃取三次，（水層放入收廢水集池）合并有機(jī)層，上層有機(jī)相，依次用50%飽和檸檬酸水溶液洗滌兩次，用飽和食鹽水洗滌兩次，上層有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，過濾除去固體硫酸鈉。濃縮有機(jī)溫度< 65°C，得棕黑色膠狀物，為12粗品.直接用于下步反應(yīng)。

m、13 的制備

室溫下向反應(yīng)釜中加入干燥的二氯甲烷，通入氮?dú)獗Ｗo(hù)，啟動(dòng)攪拌。加入12，微加熱到全溶（約30-32°C )。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，在冰鹽浴下加入對(duì)甲苯磺酸吡啶鹽（PPTS)，加完攪拌5分鐘，控制溫度在0°C，滴加原甲酸三乙酯，滴加畢，去掉冰鹽浴，用溫水控制內(nèi)溫在 25°C攪拌反應(yīng)3小時(shí)。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，展開劑=石油醚：乙酸乙酯=2 ： 1。反應(yīng)完成后， 緩慢加入飽和碳酸鈉溶液，加完后，在20-25°C攪拌半小時(shí)，然后加入分液漏斗中靜止分層， 分出下層有機(jī)相；上層水相，用二氯甲烷再萃取一次，上層水相放到收集池。然后合并下層有機(jī)相，用水洗滌兩次，下層有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，除去固體硫酸鈉。濃縮有機(jī)相溫度< 65°C，然后抽真空2小時(shí)，得粘稠狀油狀物.在氮?dú)獗Ｗo(hù)下將上述油狀物轉(zhuǎn)移到500ml 四口燒瓶中，加入乙酸酐攪拌溶解后，再加乙酸、抗氧化劑（BHT)I粒，然后在無水無氧狀態(tài)下，加熱到118-122°C保溫反應(yīng)約30小時(shí)。在保溫反應(yīng)過程中，溶液從深棕色變成黑色，TLC 監(jiān)測(cè)反應(yīng)，反應(yīng)完成后，開始分級(jí)降溫。在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，當(dāng)溫度降到65°C后，加入水與乙酸乙酯稀釋，分離乙酸乙酯層，鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，懸浮固體傾瀉，濃縮，固體用冷的乙酸乙酯洗，干燥白色固體13。

η、恩替卡韋一水合物的制備

13，加入1 ： 1四氫呋喃-甲醇，滴入2Ν鹽酸在60°C攪拌4. 5h直至原料反應(yīng)物， 冷卻至室溫，加入水與乙酸乙酯稀釋，劇烈攪拌下用IN氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.0，靜置，白色固體在有機(jī)層，分離兩相，水相用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，懸浮固體傾瀉，濃縮，固體用冷的乙酸乙酯洗，干燥得恩替卡韋一水合物白色固體。