背景[1][2]
TNFAIP3 定位于染色體6q23。其cDNA 序列長(zhǎng)度為4 440 bp，開(kāi)放讀碼框?yàn)? 370 bp，編碼790氨基酸的90 kD 蛋白-A20。A20 蛋白在羧基末端含有鋅指(Zinc finger，ZnF) 基序，在氨基端具有卵巢腫瘤(Ovarian tumor，OTU) 基序，這一結(jié)構(gòu)特點(diǎn)使其具有去泛素化和泛素化雙重酶功能。
目前，TNFAIP3在臨床和生物學(xué)方面的重要作用越來(lái)越受到人們的重視，主要有以下三方面的原因：①人類基因組學(xué)研究證實(shí)TNFAIP3 單核苷酸多態(tài)性與炎癥、自身免疫密切相關(guān)。②基因靶向小鼠的研究顯示A20能調(diào)控多種免疫細(xì)胞的功能，減少實(shí)驗(yàn)性自身免疫病的發(fā)生。③生物化學(xué)的研究揭示了A20 調(diào)控泛素依賴的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB 以及細(xì)胞生存信號(hào)通路的復(fù)雜機(jī)制。
TNFAIP3 是一個(gè)重要的負(fù)性免疫調(diào)節(jié)基因，表達(dá)于胸腺、脾臟等多個(gè)免疫器官。TNFAIP3 基因敲除的小鼠由于炎癥和多器官的組織損傷，在出生后迅速死亡。在免疫細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)的TNFAIP3 能夠阻斷由TNF 受體、Toll 樣受體、NOD 樣受體(NOD-like receptors，NLRs)或T 細(xì)胞受體(TCR) 引起的NF-κB 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活。單克隆抗體技術(shù)起源于Kohler等創(chuàng)建的體外鼠源雜交瘤技術(shù)。
經(jīng)多年研究，鼠單抗已從單純的生物實(shí)驗(yàn)室科研及臨床診斷發(fā)展到治療性抗體藥物。但鼠單抗的主要缺陷是小鼠免疫系統(tǒng)不能識(shí)別某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠單抗的親和性不如兔來(lái)源抗體的親和性高。然而由于沒(méi)有發(fā)現(xiàn)兔源性的漿細(xì)胞瘤及病毒體外轉(zhuǎn)染兔B細(xì)胞的技術(shù)困難，直到1995年在c-myc/v-abl轉(zhuǎn)基因兔身上成功地獲得了兔漿細(xì)胞瘤細(xì)胞系，得到了穩(wěn)定的兔-兔雜交瘤，才使兔單克隆抗體技術(shù)有了突破性進(jìn)展。
近年兔單克隆抗體技術(shù)日臻完善，目前商品化的兔單抗已達(dá)數(shù)千種。TNFAIP3兔單克隆抗體對(duì)應(yīng)于人TNFAIP3中殘基的合成肽。TNFAIP3兔單克隆抗體可用于熒光激活細(xì)胞分選、免疫細(xì)胞化學(xué)/免疫熒光、免疫組化—PFA固定細(xì)胞、免疫印跡等。不同應(yīng)用濃度不同，如用于WB時(shí)稀釋度為1：1000 -10000，用于免疫細(xì)胞化學(xué)時(shí)稀釋度為1：100，用于熒光激活細(xì)胞分選時(shí)稀釋度為1：50，特定應(yīng)用的工作稀釋度應(yīng)由研究者確定。
應(yīng)用[1]
1. 在生物標(biāo)記物開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用
兔單克隆抗體包括TNFAIP3兔單克隆抗體廣泛用于生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，尤其在免疫組織化學(xué)以及檢測(cè)蛋白的轉(zhuǎn)譯后修飾方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。至今已有100多種兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)用于癌癥的IHC臨床診斷與研究，其中最具代表性的就是Her2和c-Kit的IHC診斷試劑盒。在蛋白修飾研究領(lǐng)域，如蛋白的磷酸化，在與疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)信號(hào)通路中起到了至關(guān)重要的作用，使用磷酸化蛋白的兔單克隆抗體可以非常清楚地顯示蛋白的磷酸化程度。目前已有200多種磷酸化特異性的兔單克隆抗體面世。
2. 在治療抗體藥物開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用
臨床使用的大多數(shù)治療用抗體均需經(jīng)體外親和力成熟這一步驟，以提高抗體的親和力。這一過(guò)程常需8至12個(gè)月，最終親和力在納摩爾級(jí)(10-9 mol/L)。兔單抗不需使用體外親和力成熟，就能達(dá)到10-11至10-13 mol/L。這種高親和力不僅減少抗體的臨床使用量，還能減少由于使用大量抗體帶來(lái)的副作用。但這種高親和力的優(yōu)勢(shì)還需在動(dòng)物和臨床試驗(yàn)中進(jìn)一步證實(shí)。
另外，與鼠單抗的人源化相比，兔單克隆抗體的人源化更容易。因?yàn)椋脝慰寺】贵w主要由一種重鏈及輕鏈基因構(gòu)成，通過(guò)分析大量的兔單克隆抗體序列發(fā)現(xiàn)，兔與人的抗體同源性更高，約60%～76%，而小鼠與人的抗體同源性略低，為57%～72%，說(shuō)明用兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)藥物前景更廣闊。
主要參考資料
[1] 李婷婷, 崔慧斐. 兔單克隆抗體的發(fā)展及應(yīng)用前景[J]. 食品與藥品, 2012, 14(9): 373-376.
[2] 李娜, 王健健, 張帥, 等. TNFAIP3 基因多態(tài)性與自身免疫性疾病相關(guān)性的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)免疫學(xué)雜志, 2014, 30(9): 1278-1281.