背景[1][2]
熱休克蛋白是一類幫助新合成的蛋白正確折疊的分子伴侶，以往的研究已經(jīng)證明了熱休克蛋白70-1 /70-3 和40( HSP70-1 /HSP70-3 和HSP40) 的心肌保護(hù)作用。HSPA4 是HSP70 的核苷酸交換因子。德國(guó)科學(xué)家Belal A．Mohamed 等發(fā)現(xiàn)，在壓力超負(fù)荷和容量超負(fù)荷模型小鼠中，只有壓力超負(fù)荷小鼠出現(xiàn)HSPA4 表達(dá)上調(diào)。
有研究檢測(cè)了主動(dòng)脈狹窄患者和正常人心臟中HSPA4 的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)主動(dòng)脈狹窄患者HSPA4 蛋白表達(dá)增高，這提示后負(fù)荷增加是導(dǎo)致HSPA4 在心臟中表達(dá)升高的主要因素。免疫熒光證實(shí)HSPA4 主要表達(dá)在小鼠心肌胞質(zhì)中。研究人員還比較2、12 和24周齡野生小鼠和Hspa4 KO 小鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化，發(fā)現(xiàn)Hspa4 KO 小鼠心重/體重比增加，心肌細(xì)胞直徑增大，心肌肥大和纖維化的標(biāo)志物表達(dá)上升，但收縮功能尚無(wú)明顯改變。
研究人員給KO 和WT 小鼠行主動(dòng)脈縮窄術(shù)( TAC)，結(jié)果顯示Hspa4 KO 小鼠心肌肥大和纖維化更加嚴(yán)重，這些結(jié)果提示HSPA4 缺陷會(huì)加重病理性心肌肥大和壓力超負(fù)荷后的心肌重構(gòu)。HSPA4 在控制心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)質(zhì)量、維持蛋白折疊和穩(wěn)態(tài)中的重要作用。單克隆抗體技術(shù)起源于Kohler等創(chuàng)建的體外鼠源雜交瘤技術(shù)。經(jīng)多年研究，鼠單抗已從單純的生物實(shí)驗(yàn)室科研及臨床診斷發(fā)展到治療性抗體藥物。
但鼠單抗的主要缺陷是小鼠免疫系統(tǒng)不能識(shí)別某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠單抗的親和性不如兔來(lái)源抗體的親和性高。然而由于沒(méi)有發(fā)現(xiàn)兔源性的漿細(xì)胞瘤及病毒體外轉(zhuǎn)染兔B細(xì)胞的技術(shù)困難，直到1995年在c-myc/v-abl轉(zhuǎn)基因兔身上成功地獲得了兔漿細(xì)胞瘤細(xì)胞系，得到了穩(wěn)定的兔-兔雜交瘤，才使兔單克隆抗體技術(shù)有了突破性進(jìn)展。近年兔單克隆抗體技術(shù)日臻完善，目前商品化的兔單抗已達(dá)數(shù)千種。
HSPA4兔單克隆抗體-20℃保存，Western一抗稀釋液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀釋液優(yōu)先推薦4℃保存，長(zhǎng)期不使用可以考慮-20℃保存，但凍融可能會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)輕微的渾濁和少量不溶物。HSPA4兔單克隆抗體可用于WB、IF、 IHC、ICC、 FC，不同應(yīng)用濃度不同。如果HSPA4兔單克隆抗體用于Western blot (WB)、免疫熒光(IF)、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)等實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)注意回收使用過(guò)的稀釋抗體。
回收的抗體通常至少可以重復(fù)使用5-10次。稀釋后的抗體，包括已經(jīng)使用過(guò)的稀釋抗體，請(qǐng)4℃保存?；厥蘸笾貜?fù)使用的抗體，使用方法同新鮮稀釋的抗體。如果在重復(fù)使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)抗體出現(xiàn)輕微混濁現(xiàn)象，可以10000g離心1-3分鐘，取上清用于后續(xù)檢測(cè)。如果回收的抗體出現(xiàn)明顯的絮狀物或長(zhǎng)霉長(zhǎng)菌等情況，則可以考慮廢棄該抗體。
應(yīng)用[1]
1. 在生物標(biāo)記物開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用
兔單克隆抗體包括HSPA4兔單克隆抗體廣泛用于生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，尤其在免疫組織化學(xué)以及檢測(cè)蛋白的轉(zhuǎn)譯后修飾方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。至今已有100多種兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)用于癌癥的IHC臨床診斷與研究，其中最具代表性的就是Her2和c-Kit的IHC診斷試劑盒。在蛋白修飾研究領(lǐng)域，如蛋白的磷酸化，在與疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)信號(hào)通路中起到了至關(guān)重要的作用，使用磷酸化蛋白的兔單克隆抗體可以非常清楚地顯示蛋白的磷酸化程度。目前已有200多種磷酸化特異性的兔單克隆抗體面世。
2. 在治療抗體藥物開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用
臨床使用的大多數(shù)治療用抗體均需經(jīng)體外親和力成熟這一步驟，以提高抗體的親和力。這一過(guò)程常需8至12個(gè)月，最終親和力在納摩爾級(jí)(10-9 mol/L)。兔單抗不需使用體外親和力成熟，就能達(dá)到10-11至10-13 mol/L。這種高親和力不僅減少抗體的臨床使用量，還能減少由于使用大量抗體帶來(lái)的副作用。但這種高親和力的優(yōu)勢(shì)還需在動(dòng)物和臨床試驗(yàn)中進(jìn)一步證實(shí)。
另外，與鼠單抗的人源化相比，兔單克隆抗體的人源化更容易。因?yàn)?，兔單克隆抗體主要由一種重鏈及輕鏈基因構(gòu)成，通過(guò)分析大量的兔單克隆抗體序列發(fā)現(xiàn)，兔與人的抗體同源性更高，約60%～76%，而小鼠與人的抗體同源性略低，為57%～72%，說(shuō)明用兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)藥物前景更廣闊。
主要參考資料
[1] 李婷婷, 崔慧斐. 兔單克隆抗體的發(fā)展及應(yīng)用前景[J]. 食品與藥品, 2012, 14(9): 373-376.
[2] 謝玥, 吳立玲. 靶向破壞 Hspa4 基因可導(dǎo)致心肌肥大和纖維化[J]. 生理科學(xué)進(jìn)展, 2013, 44(3): 168-168.