背景[1][2]
單克隆抗體技術(shù)起源于Kohler等創(chuàng)建的體外鼠源雜交瘤技術(shù)。經(jīng)多年研究，鼠單抗已從單純的生物實(shí)驗(yàn)室科研及臨床診斷發(fā)展到治療性抗體藥物。但鼠單抗的主要缺陷是小鼠免疫系統(tǒng)不能識(shí)別某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠單抗的親和性不如兔來源抗體的親和性高。然而由于沒有發(fā)現(xiàn)兔源性的漿細(xì)胞瘤及病毒體外轉(zhuǎn)染兔B細(xì)胞的技術(shù)困難，直到1995年在c-myc/v-abl轉(zhuǎn)基因兔身上成功地獲得了兔漿細(xì)胞瘤細(xì)胞系，得到了穩(wěn)定的兔-兔雜交瘤，才使兔單克隆抗體技術(shù)有了突破性進(jìn)展。
近年兔單克隆抗體技術(shù)日臻完善，目前商品化的兔單抗已達(dá)數(shù)千種。survivin 作為凋亡抑制蛋白家族中獨(dú)特一員，參與細(xì)胞的分裂和增殖過程調(diào)節(jié)，在細(xì)胞凋亡抑制中起重要作用。鑒于組織分布的特點(diǎn)及與多數(shù)腫瘤相對(duì)關(guān)聯(lián)性，其研究為腫瘤臨床診斷、治療提供了有力支持。
熱休克蛋白（heat shock protein, HSP）是在各種應(yīng)激因素特別是高溫環(huán)境因素的誘導(dǎo)下產(chǎn)生的一類蛋白質(zhì)，廣泛存在于人、動(dòng)物、微生物和植物的細(xì)胞中，能提高細(xì)胞對(duì)抗各種損傷因素的能力，并促進(jìn)細(xì)胞對(duì)各種刺激所造成的損傷進(jìn)行自身修復(fù)，具有重要的生物學(xué)功能，并與腫瘤細(xì)胞的增殖密切相關(guān)，HSPs- 肽復(fù)合物通過活化體內(nèi)多個(gè)CTL 克隆，可望特異殺傷同一種腫瘤內(nèi)所有腫瘤細(xì)胞，打破免疫耐受，消滅殘存瘤組織，克服目前腫瘤中難以解決的抗原多變性及細(xì)胞異質(zhì)性等困難。
根據(jù)其分子量的不同，可分為HSP110，HSP90，HSP70，HSP60 及小分子熱休克蛋白亞家族。其中小分子熱休克蛋白（small heat shock protein, sHSP）幾乎存在于所有生物體中，具有保守的α 晶體蛋白結(jié)構(gòu)域，在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著不同的功能。
熱休克蛋白27（heat shock protein 27，HSP27）又稱熱休克蛋白B1（heat shock protein B1, HSPB1）是小分子熱休克蛋白家族的重要成員，普遍表達(dá)于多種組織細(xì)胞，以心肌細(xì)胞和神經(jīng)元等終末分化細(xì)胞含量最為豐富，可通過提高線粒體氧化還原狀態(tài)、結(jié)合Fas 死亡域相關(guān)蛋白Daxx 和Cytc、抑制caspase 級(jí)聯(lián)激活等機(jī)制抑制細(xì)胞凋亡，參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的增殖、分化和細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，保護(hù)細(xì)胞免受各種應(yīng)激因素的損傷。近年來HSP27/HSPB1 與各種臨床疾病特別是腫瘤的關(guān)系日益受到重視。
磷酸化HSP27 (pSer82)兔單克隆抗體可用于免疫組織化學(xué)技術(shù)如免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。原理是抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性，免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動(dòng)物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測(cè)組織或細(xì)胞中的同類的抗原物質(zhì)。
由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的，因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來，以其達(dá)到對(duì)組織或細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行定性，定位或定量的研究。磷酸化HSP27 (pSer82)兔單克隆抗體于-20℃保存，Western一抗稀釋液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀釋液優(yōu)先推薦4℃保存，長(zhǎng)期不使用可以考慮-20℃保存，但凍融可能會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)輕微的渾濁和少量不溶物。如果磷酸化HSP27 (pSer82)兔單克隆抗體用于Western blot (WB)、免疫熒光(IF)、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)等實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)注意回收使用過的稀釋抗體。
回收的磷酸化HSP27 (pSer82)兔單克隆抗體通常至少可以重復(fù)使用5-10次。稀釋后的抗體，包括已經(jīng)使用過的稀釋抗體，請(qǐng)4℃保存?；厥蘸笾貜?fù)使用的抗體，使用方法同新鮮稀釋的抗體。如果在重復(fù)使用過程中發(fā)現(xiàn)抗體出現(xiàn)輕微混濁現(xiàn)象，可以10000g離心1-3分鐘，取上清用于后續(xù)檢測(cè)。如果回收的抗體出現(xiàn)明顯的絮狀物或長(zhǎng)霉長(zhǎng)菌等情況，則可以考慮廢棄該抗體。
主要參考資料
[1] 李婷婷，崔慧斐. 兔單克隆抗體的發(fā)展及應(yīng)用前景[J]. 食品與藥品，2012，14(9)： 373-376.
[2] 田方艷, 曹輝, 張培湘, 等. 小鼠 HSP27/HSPB1 單克隆抗體的制備和鑒定[J]. 腫瘤藥學(xué), 2013 (1): 26-29.