背景及概述[1]
N'-[(2,3-二氫-2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-基)磺?；鵠-N-芴甲氧羰基-D-精氨酸簡稱Fmoc-Arg(Pbf)-OH。精氨酸是一種可以在體內(nèi)自然產(chǎn)生的必需氨基酸。在生命科學(xué)研究中，為了避免副產(chǎn)物的產(chǎn)生，必須對(duì)精氨酸的氨基和胍基進(jìn)行保護(hù)。Fmoc-Arg(Pbf)-OH就是利用Fmoc(9-芴甲氧羰基)保護(hù)氨基，用Pbf(2，2，4，6，7-五甲基苯并呋喃-5-磺?；?保護(hù)胍基。
制備[1]
(1)酯化
a1.將100L無水乙醇加入預(yù)先干燥的300L反應(yīng)釜內(nèi)，通冰鹽水降溫至-5～-10℃，滴加二氯亞砜13L。
b1.加入D型的Arg.HCl 21.5kg，關(guān)閉冰鹽水，自然升溫至室溫反應(yīng)24小時(shí)。
c1.升溫至35℃反應(yīng)，TLC點(diǎn)板跟蹤反應(yīng)情況，反應(yīng)大約48h結(jié)束。
d1.濃縮：反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮得到油狀物的Arg·Oet·2HCl中間體。
(2)引入Boc基團(tuán)
a2.在300L反應(yīng)釜內(nèi)加入150L水，再加入碳酸氫鈉25.2kg，攪拌；
逐漸加入Arg·Oet·2HCl油狀物；加入四氫呋喃30L；分批加入(Boc)2O，26.2kg攪拌，室溫反應(yīng)；
TLC法點(diǎn)板跟蹤反應(yīng)情況，當(dāng)Arg·Oet·2HCl反應(yīng)完即開始處理。
b2.酸化：反應(yīng)完成后調(diào)節(jié)pH 3-4，用石油醚/乙酸乙酯(50L:25L)，萃??；
c2.加鹽飽和，回調(diào)PH 6-7，用乙酸乙酯提產(chǎn)品，用飽和食鹽水洗滌有機(jī)相。
d2.干燥：向有機(jī)相(帶產(chǎn)品的乙酸乙酯溶液中)中加入60kg的無水硫酸鈉，干燥8小時(shí)。
e2.提純濃縮：抽濾掉硫酸鈉固體，減壓蒸餾乙酸乙酯相。濃縮后得到的Boc-ArgOet.HCl 油狀物。
(3)引入Pbf
a3.在300L反應(yīng)釜中加入步驟2得到的Boc-ArgOet.HCl，Pbf-Cl 31.9kg，丙酮200L，碳酸鉀41.7kg，攪拌，加少量水，維持溫度40-45℃，用TLC監(jiān)測反應(yīng)，待Boc-ArgOet.HCl完全反應(yīng)進(jìn)行抽濾，
b3.抽濾，除去固體不溶物，減壓蒸餾丙酮，濃縮后的得到Boc-Arg(Pbf)Oet油狀物待用。
(4)脫Boc
a4.在干燥的300L反應(yīng)釜中，加入3N HCl/乙酸乙酯溶液120L，攪拌下加入Boc-Arg(Pbf) Oet油狀物，維持溫度10-15℃，室溫?cái)嚢琛?/p>
b4.脫Boc完成后，加水洗滌，將產(chǎn)品洗至水相，加適量碳酸鈉調(diào)節(jié)水相pH7。
(5)皂化
a5.將步驟(4)所得水相加95％乙醇100L，攪拌，滴加10N NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH 11-12 進(jìn)行皂化。
b5.皂化反應(yīng)結(jié)束后，用6NHCl調(diào)節(jié)反應(yīng)液的pH值至7，降溫至-10-0℃冷凍結(jié)晶；離心，固體用乙酸乙酯攪洗一次，離心甩干收集固體；重結(jié)晶得到H-Arg(Pbf)OH固體。
(6)Fmoc-Arg(Pbf)-OH合成
a6.在反應(yīng)釜中加入H-Arg(Pbf)-OH，水120L、THF，用Na2CO3調(diào)節(jié)PH＝8.5。
b6.逐漸加入Fmoc-Osu(芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺)，控制溫度15-20℃，PH＝8-9以把Arg(Pbf) 反應(yīng)完，盡量避免Fmoc-Osu過量。
TLC點(diǎn)板跟蹤反應(yīng)情況，從加完Fmoc-Osu開始計(jì)算，反應(yīng)時(shí)間6小時(shí)。
c6.純化：用石油醚/乙酸乙酯(2:1)萃??；水相用HCl酸化至pH＝3，攪拌2小時(shí)。酸化溫度0-10℃；加乙酸乙酯萃取產(chǎn)品；用飽和食鹽水洗至pH達(dá)到6；無水硫酸鈉干燥，真空抽濾除去固體，濾液濃縮，減壓濃縮得到固體，真空干燥得到產(chǎn)品。
產(chǎn)品純度99.6％，單雜0.09％，L型異構(gòu)體0.15％。
參考文獻(xiàn)
[1] [中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)] CN201710305099.X Fmoc-Arg（Pbf）-OH的合成方法【公開】/Fmoc-Arg（Pbf）-OH的合成方法【授權(quán)】