背景^[1-3]

BCA蛋白質(zhì)定量檢測(cè)試劑盒是進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度測(cè)定的最常用試劑盒。

BCA蛋白定量的主要原理是：蛋白質(zhì)在堿性條件下，可以將二價(jià)Cu2+離子還原成一價(jià)Cu+離子。產(chǎn)生的一價(jià)Cu+離子可以與BCA（Bicinchoninic acid）試劑結(jié)合，最終生成紫色的復(fù)合物。該復(fù)合物在562 nm處有很強(qiáng)的吸收峰。復(fù)合物的多少與蛋白質(zhì)的濃度呈接近的線性關(guān)系。

BCA蛋白質(zhì)定量檢測(cè)試劑產(chǎn)品圖

BCA蛋白定量試劑盒有許多優(yōu)點(diǎn)：

1.檢測(cè)的靈敏度高，檢測(cè)的蛋白質(zhì)濃度下限可達(dá)20μg/mL。

2.線性范圍廣，在20-2000μg/mL的范圍內(nèi)，呈接近的線性關(guān)系。

3.兼容性良好，產(chǎn)品可以兼容的化學(xué)物質(zhì)非常廣泛（詳細(xì)的兼容情況見(jiàn)附錄）。

產(chǎn)品組成?

1.BCA試劑A:500 mL.

2.BCA試劑B:15 mL.

3.蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（BSA，2 mg/mL）：10 mL.

使用方法

1.BCA工作液的配制

（1）BCA工作液總體積的計(jì)算：

BCA工作液總體積=（標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量+待測(cè)樣品數(shù)量+1）×重復(fù)數(shù)×200μL。

舉例：如果標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量為8，待測(cè)樣品數(shù)量1，重復(fù)數(shù)為3，則BCA工作液總體積=（8+1+1）×3×200μL=6000μL

（2）BCA工作液的配制：按50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑B（A:B=50:1），充分混勻。

舉例：將5000μL的BCA試劑A與100μL的BCA試劑B混合，得到5100μL的BCA工作液。

2.BSA標(biāo)準(zhǔn)品的配制

將BSA標(biāo)準(zhǔn)品做系列稀釋?zhuān)謩e得到如下9個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品：2000μg/mL，1500μg/mL，1000μg/mL，500μg/mL，250μg/mL，125μg/mL，62.5μg/mL，31.25μg/mL，0μg/mL。

3.取BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品各25μL到96孔板孔內(nèi)，

4.往每孔中加入200μL的BCA工作液，蓋上96孔板蓋子。

5.將96孔板放37℃，30分鐘。

6.用酶標(biāo)儀測(cè)562 nm處的光吸收值。

7.根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的光吸收值（扣除空白孔的光吸收值即為最終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣品的蛋白濃度。

應(yīng)用^[4][5]

用于不同倍性水稻不同發(fā)育時(shí)期胚乳蛋白含量測(cè)定與谷蛋白質(zhì)譜分析研究

以矮腳南特同源四倍體為材料、相應(yīng)的二倍體為對(duì)照,利用BCA蛋白質(zhì)濃度測(cè)定法,對(duì)稻米胚乳不同發(fā)育時(shí)期的4種蛋白（清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白）的積累動(dòng)態(tài)進(jìn)行了深入研究,并對(duì)谷蛋白進(jìn)行了質(zhì)譜分析,比較分析同一時(shí)期不同材料的谷蛋白及不同時(shí)期同一材料的谷蛋白的表達(dá)差異。

結(jié)果：同源四倍體水稻的貯藏蛋白各組分分布與其二倍體水稻基本一致。同源四倍體水稻與其二倍體水稻相比,其四種主要貯藏蛋白組分的含量有上調(diào),也有下調(diào)。

開(kāi)花授粉后第6d,清球蛋白含量同源四倍體水稻高于二倍體水稻,授粉后第7d后清球蛋白含量二倍體高于四倍體,一直到授粉后第20d接近持平;醇溶蛋白含量授粉后第6d到第9d之間基本持平,授粉后第9d二倍體含量高于四倍體;谷蛋白含量從授粉后第6d到第9d處于上升階段,授粉后第9d后含量有所下降,授粉后第12d谷蛋白又有所增加,授粉后第15d含量又下降,授粉后第20d谷蛋白含量明顯比授粉后第15d有所減少。

二倍體與四倍體水稻谷蛋白含量變化趨勢(shì)相一致,含量對(duì)比,前期二倍體水稻谷蛋白含量比四倍體含量多,后期四倍體水稻谷蛋白含量多。

矮腳南特同源四倍體水稻與二倍體水稻清球蛋白含量從授粉后第6d開(kāi)始積累且一直呈現(xiàn)上升趨勢(shì),醇溶蛋白含量從授粉后第9d開(kāi)始積累。谷蛋白含量從授粉后第9d開(kāi)始下降,接著授粉后第12d又繼續(xù)積累,15d含量到達(dá)頂峰,接著又下降一直到授粉后第20d,因此授粉后第9d,12d,15d和20d是谷蛋白含量積累的重要時(shí)間點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1]Polyploidy and genome evolution in plants[J].Keith L Adams,Jonathan F Wendel.Current Opinion in Plant Biology.2005(2)

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[3]Identification of cis-regulatory elements required for endosperm expression of the rice storage protein glutelin gene GluB-1[J].Haruhiko Washida,Chuan-Yin Wu,Akihiro Suzuki,Utako Yamanouchi,Tomoya Akihama,Kyuya Harada,Fumio Takaiwa.Plant Molecular Biology.1999(1)

[4]Deposition of storage proteins[J].Klaus Müntz.Plant Molecular Biology.1998(1)

[5]冼霖.不同倍性水稻不同發(fā)育時(shí)期胚乳蛋白含量測(cè)定與谷蛋白質(zhì)譜分析[D].華南農(nóng)業(yè)大學(xué),2018.