青蒿琥酯AS作為抗瘧疾藥物其抗炎作用已經(jīng)被廣泛熟知，然而第三軍醫(yī)大學(xué)研究團(tuán)隊(duì)近日發(fā)表于BJP的文章表明，青蒿琥酯是一種雙向免疫調(diào)節(jié)劑，在敗血癥引發(fā)的免疫抑制中可發(fā)揮促炎和細(xì)菌清除的作用，通過與維生素D受體VDR作用增強(qiáng)自噬逆轉(zhuǎn)免疫抑制。

AS體內(nèi)逆轉(zhuǎn)敗血癥引起的免疫抑制

給予AS治療后，盲腸結(jié)扎和穿刺CLP小鼠死亡率明顯下降，血清、脾臟、肺中TNF-α等促炎細(xì)胞因子含量上升，細(xì)菌負(fù)荷減少。

在LPS耐受的巨噬細(xì)胞中AS可增加促炎細(xì)胞因子釋放和細(xì)菌清除

研究者采用與5ng/mL LPS共孵4h后加入100ng/mL LPS的方法建立了LPS耐受的細(xì)胞模型，和體內(nèi)結(jié)果一致，AS增加TNF-α、IL-6釋放，減少細(xì)菌負(fù)荷的作用在RAW264.7和THP-1細(xì)胞都得到了驗(yàn)證。

AS與VDR相互作用

在LPS耐受的巨噬細(xì)胞中VDR在mRNA和蛋白水平表達(dá)的變化在20個候選靶點(diǎn)最明顯。Vdr-KD細(xì)胞失去LPS耐受表型，AS無法發(fā)揮作用。Vdr-OE細(xì)胞中AS也失去了增加TNF-α釋放的作用。與VDR天然激動劑VD3孵育后，和VDR結(jié)合的熒光標(biāo)記的AS減少，增加TNF-α作用消失，上述結(jié)果表明AS作為拮抗劑與VDR發(fā)生作用逆轉(zhuǎn)免疫抑制。

AS抑制VDR核轉(zhuǎn)位調(diào)節(jié)其靶基因ATG16L1轉(zhuǎn)錄

免疫印跡和免疫染色結(jié)果顯示LPS耐受細(xì)胞核內(nèi)VDR增加，AS可抑制其核轉(zhuǎn)位。染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)果顯示AS負(fù)向調(diào)控了VDR與ATG16L1啟動子的結(jié)合，增加了胞內(nèi)ATG16L1含量。

AS體外通過VDR發(fā)揮自噬依賴的作用

ATG16L1是一種自噬調(diào)節(jié)劑，自噬相關(guān)分子LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ、ATG5在LPS耐受細(xì)胞中減少，AS處理促進(jìn)了自噬恢復(fù)。

AS體外抑制VDR與NF-κB p65相互作用

轉(zhuǎn)錄因子NF-κB可調(diào)節(jié)TNF-α、IL-6等多種促炎細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄。免疫共沉淀顯示AS可降低胞質(zhì)內(nèi)與VDR結(jié)合的NF-κB p65水平，抑制VDR與NF-κB p65共定位，逆轉(zhuǎn)LPS耐受細(xì)胞NF-κB p65核轉(zhuǎn)位下降的現(xiàn)象，并進(jìn)一步驗(yàn)證了AS可增加核內(nèi)NF-κB p65蛋白含量。研究者還通過VDR沉默與過表達(dá)模型，NF-κB p65沉默與過表達(dá)模型證明了AS通過抑制VDR與NF-κB p65相互作用，促進(jìn)NF-κB p65核轉(zhuǎn)位及下游促炎細(xì)胞因子釋放。

AS對VDR敲低小鼠失去作用

與體外結(jié)果一致，CLP小鼠的腹膜巨噬細(xì)胞VDR水平升高，并可被AS抑制。VDR敲低的小鼠失去免疫抑制表型，脾臟及肺中TNF-α水平上升，自噬相關(guān)蛋白增加，AS失去原有作用。

VDR過表達(dá)導(dǎo)致的自噬抑制或是干預(yù)敗血癥引起免疫抑制的新靶點(diǎn)，期待青蒿琥酯雙向免疫調(diào)節(jié)作用的深入研究。