背景[1-3]
B16細(xì)胞（小鼠黑色素瘤細(xì)胞）是指惡性黑色素瘤，是黑色素細(xì)胞來(lái)源的一種高度惡性的腫瘤，簡(jiǎn)稱惡黑，多發(fā)生于皮膚，也可見(jiàn)于黏膜和內(nèi)臟，約占全部腫瘤的3%。是由異常黑素細(xì)胞過(guò)度增生引發(fā)的，惡性程度極高，占皮膚腫瘤死亡病例的極大部分。
黑色素瘤病變多發(fā)生于真皮和表皮交界處，瘤細(xì)胞類似痣細(xì)胞，但明顯異型，細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)充滿黑色素，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)和黑色素量的不一，可分5型：
1、大上皮樣細(xì)胞多見(jiàn)，細(xì)胞呈多邊形。
2、小上皮樣細(xì)胞核大而不典型。
3、梭形細(xì)胞胞質(zhì)呈原纖維樣，核大染色深。
4、畸形細(xì)胞為單核或多核。
5、樹(shù)枝突細(xì)胞比正常黑色素細(xì)胞大，胞核異型，瘤細(xì)胞對(duì)酪酶呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，含黑色素少時(shí)，在HE切片內(nèi)難以證實(shí)，故有“無(wú)黑色素性黑色素瘤”之稱，但若用銀染色，在少數(shù)細(xì)胞內(nèi)仍可檢出黑色素。
黑色素細(xì)胞是一種皮膚里的特殊的細(xì)胞，它產(chǎn)生黑色素，傳遞給周圍的角質(zhì)形成細(xì)胞。黑色素停留在這些角質(zhì)形成細(xì)胞的細(xì)胞核上起保護(hù)作用，防止染色體受到光線輻射受損。黑色素細(xì)胞能合成并分泌黑色素，因此是一種腺細(xì)胞。然而黑色素的生物合成非常復(fù)雜，是通過(guò)色體（未成熟的黑色素）內(nèi)酪氨酸—酪氨酸酶反應(yīng)形成的。
應(yīng)用[4][5]
用于孜然提取物對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用及對(duì)B16黑色素瘤細(xì)胞內(nèi)黑色素生成的影響研究
以孜然為原料,優(yōu)化了孜然提取物抑制酪氨酸酶活性的提取工藝,測(cè)定了孜然提取物中主要活性成分的含量,研究了孜然提取物對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用及對(duì)小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞內(nèi)黑色素合成的影響,并考察了孜然提取物不同極性部位抗氧化活性及對(duì)酪氨酸酶活性的抑制效果,以期為孜然作為天然的美白材料應(yīng)用于化妝品行業(yè)提供理論依據(jù)。
主要研究結(jié)果如下:1.從乙醇、丙酮和水三種溶劑中篩選得到乙醇是孜然抑制酪氨酸酶活性成分的提取溶劑。在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上結(jié)合響應(yīng)面設(shè)計(jì),優(yōu)化得到孜然提取物抑制酪氨酸酶活性的提取工藝參數(shù):乙醇體積分?jǐn)?shù)71%,液料比16:1（m L/g）,提取時(shí)間2.2h,提取溫度83℃,此優(yōu)化條件下得到的孜然提取物對(duì)酪氨酸酶活性抑制率達(dá)（42.61±0.56）%,與預(yù)測(cè)值接近。
2. 采用Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定多酚含量,Na NO2-Al（NO3）3-Na OH比色法測(cè)定黃酮含量,香草醛比色法測(cè)定皂苷含量,苯酚-硫酸比色法測(cè)定多糖含量,結(jié)果表明孜然提取物中多酚、黃酮、皂苷、多糖的含量分別為（1.35±0.03）%、（4.40±0.29）%、（0.76±0.04）%、（4.89±0.28）%。
3.孜然提取物對(duì)酪氨酸酶活性抑制作用的研究結(jié)果表明,孜然提取物對(duì)酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活性都具有明顯的抑制效果,均呈濃度依賴關(guān)系,IC50分別為1.027mg/m L和0.977mg/m L;孜然提取物能延長(zhǎng)酪氨酸酶催化氧化L-酪氨酸的遲滯時(shí)間,遲滯時(shí)間與孜然提取物濃度呈正相關(guān);孜然提取物抑制酪氨酸酶二酚酶活性的動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明,其抑制類型屬于可逆混合型,抑制常數(shù)KI為0.62mg/m L。
參考文獻(xiàn)
[1]Agro-morphological and phytochemical diversity of Iranian Cuminum cyminum accessions[J].Mohammad Moghaddam,Abdollah Ghasemi Pirbalouti.Industrial Crops&Products.2017
[2]Chaetocin inhibits IBMX-induced melanogenesis in B16F10 mouse melanoma cells through activation of ERK[J].Jung-Soo Bae,Mira Han,Cheng Yao,Jin Ho Chung.Chemico-Biological Interactions.2016
[3]Chemical Composition and Antioxidant Activity Cuminum cyminum L.Essential Oils[J].Ali Reza Ladan Moghadam.International Journal of Food Properties.2016(2)
[4]Isolation,purification,and antioxidant activities of degraded polysaccharides from Enteromorpha prolifera[J].Jie Xu,Li-Li Xu,Qin-Wei Zhou,Shu-Xian Hao,Tao Zhou,Hu-Jun Xie.International Journal of Biological Macromolecule.2015
[5]杜國(guó)英.孜然提取物對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用及對(duì)B16黑色素瘤細(xì)胞內(nèi)黑色素生成的影響[D].蘭州理工大學(xué),2018.