背景[1-3]
成人間質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基可用于成人間質(zhì)干細(xì)胞的原代及傳代培養(yǎng)，能有效維持骨髓間質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)能力；能有效維持骨髓間質(zhì)干細(xì)胞多向分化能力。
培養(yǎng)基成分：
成人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基440 mL；成人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞專(zhuān)用胎牛血清50 mL；雙抗5 mL；谷氨酰胺5 mL。
骨髓原始間充質(zhì)干細(xì)胞是骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，是人們?cè)诓溉閯?dòng)物的骨髓基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的一種具有分化形成骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)及成肌細(xì)胞的多種分化潛能的細(xì)胞亞群。它們對(duì)骨髓中的造血干細(xì)胞（HSC）不僅有機(jī)械支持作用，還能分泌多種生長(zhǎng)因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）來(lái)支持造血。
常用的分離MSC的方法主要有全骨髓法和密度梯度離心法，全骨髓法即根據(jù)干細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中有貼壁優(yōu)勢(shì)特性，定期換液除去不貼壁細(xì)胞，從而達(dá)到純化及擴(kuò)增MSC的目的。密度梯度離心法即根據(jù)骨髓中各細(xì)胞成分比重的不同，分離單核細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
二者本質(zhì)上無(wú)多大區(qū)別。隨著對(duì)MSC表面抗原認(rèn)識(shí)的深入，又有人利用免疫方法如流式細(xì)胞儀法、免疫磁珠法等對(duì)其進(jìn)行分離純化。但經(jīng)過(guò)流式或磁珠分選后的細(xì)胞出現(xiàn)了增殖緩慢等一些問(wèn)題，加之成本較高和技術(shù)的難度，在某種程度上限制了這些方法的廣泛應(yīng)用。
應(yīng)用[4][5]
用于FGF-2和BMP-2誘導(dǎo)低密度人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSCs）成骨分化的協(xié)調(diào)機(jī)制研究
通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)FGF-2和BMP-2單獨(dú)、聯(lián)合作用對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs)增殖效應(yīng)的效應(yīng)。
方法：采用CyQUANT Cell Proliferation Assay檢測(cè)法,檢測(cè)不同濃度FGF-2和BMP-2單獨(dú)、聯(lián)合應(yīng)用3天后hMSCs增殖的狀況,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
結(jié)果：FGF-2能顯著地均促進(jìn)hMSCs的增殖,并呈劑量依賴(lài)性,當(dāng)達(dá)到20ng/mL時(shí)促增殖能力最強(qiáng),而之后加大濃度促增殖能力減弱。相反的,BMP-2呈現(xiàn)出階段性的抑制增殖作用,低濃度(0.1-1.0ng/mL)時(shí),BMP-2對(duì)細(xì)胞增殖的促進(jìn)或抑制作用均不明顯,高濃度(10-200ng/mL)時(shí)能抑制細(xì)胞增殖,且抑制效果與劑量有關(guān)。
結(jié)論：不同生長(zhǎng)因子的不同處理方式對(duì)hMSCs增殖的效應(yīng)不同。聯(lián)合使用FGF-2和BMP-2時(shí),細(xì)胞增殖能力下降,BMP-2影響FGF-2促細(xì)胞增殖能力。
檢測(cè)FGF-2和BMP-2單獨(dú)、聯(lián)合作用對(duì)人hMSCs分化的效應(yīng)。
方法：通過(guò)定量生化比色法測(cè)定不同樣品BMP-2、FGF-2、FGF-2/BMP-2處理按6孔培養(yǎng)板最低細(xì)胞密度接種培養(yǎng)的細(xì)胞后的堿性磷酸酶(ALP)時(shí)間曲線(xiàn)以檢測(cè)生長(zhǎng)因子(GFs)對(duì)ALP活性的影響。應(yīng)用分光光度法檢測(cè)單獨(dú)、聯(lián)合施加BMP-2和FGF-2后,hMSCs細(xì)胞外基質(zhì)鈣含量水平以反映對(duì)細(xì)胞分化作用的影響,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
結(jié)果：BMP-2能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)明顯提高細(xì)胞ALP活性水平及促進(jìn)鈣的沉積,而FGF-2則起到抑制作用。BMP-2單獨(dú)作用成骨效應(yīng)明顯高于FGF-2或兩種生長(zhǎng)因子聯(lián)合作用。
結(jié)論：不同生長(zhǎng)因子的不同處理方式對(duì)hMSCs分化的效應(yīng)不同。FGF-2和BMP-2聯(lián)合應(yīng)用會(huì)抑制BMP-2的促成骨分化能力。
參考文獻(xiàn)
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