背景[1-3]
Α-促黑素細胞刺激素（α-Melanocyte Stimalating Hormoneα-MSH）是一種內(nèi)源性的神經(jīng)調(diào)節(jié)肽，人類垂體細胞及許多垂體外細胞都可產(chǎn)生。通過與其受體結(jié)合發(fā)揮作用。在生理狀態(tài)下，αMSH在體內(nèi)的濃度非常低，變化范圍小。當機體產(chǎn)生炎癥時，αMSH在血槳中濃度增高，αMSH具有強有力的抗炎免疫調(diào)節(jié)能力，抑制前炎癥細胞因子的生成及活性，使巨噬細胞合成一氧化氮減少，抑制中性粒細胞的趨化性，調(diào)整前列腺素的合成，促進抗生細胞因子IL-10的合成。
藥盒組成：
1、125I-αMSH（凍干品）
2、αMSH抗體（凍干品）
3、標準品β-EP（凍干品），濃度分別為0、0.5、1、2、4、8ng/ml
4、分離劑(第二抗體)
5、緩沖液
實驗步驟：
取組織（米粒大小），立即稱重后加到1ml 100℃生理鹽水中煮沸5分鐘后迅速冷卻，再加0.5ml 1N醋酸制成勻漿，置4℃1-2小時后離心2000 G 15分鐘，取上清，冷凍干燥后用RIA緩沖液復(fù)溶，進行RIA測定。或煮沸迅速冷卻后用0.1N鹽酸制成勻漿，置4℃1-2小時后再用0.1N NaOH中和，離心取上清液-20℃保存待測。振蕩3分鐘，3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘，棄上清，測沉淀計數(shù)cpm。
結(jié)果計算：
以N/T、B/T計算NBS、S0結(jié)合百分率，以B/B0計算標準及待測樣品結(jié)合百分率，在半對數(shù)坐標紙上繪制標準曲線，并查出樣品值?；蛴勺詣?gamma;計數(shù)器預(yù)先編制程序，直接給出有關(guān)參數(shù)，標準曲線及樣品濃度。
應(yīng)用[4][5]
用于父代高血糖改變子代下丘腦攝食調(diào)節(jié)神經(jīng)通路加速肥胖形成的分子機制研究
妊娠期合并糖尿病可引起子代代謝紊亂,增加子代患糖尿病和其他代謝性疾病的風險。而父代高血糖對子代的影響目前研究較少,且集中于流行病學調(diào)查和臨床特征的觀察,缺乏深度的機制研究。
HE染色觀察脂肪組織脂質(zhì)沉積情況;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清中瘦素(Leptin)和a-黑素細胞刺激素(a-MSH)水平;實時熒光定量PCR(real-time q-PCR)檢測子代下丘腦中瘦素受體(Lepr)、神經(jīng)肽Y(NPY)、阿片-促黑素細胞皮質(zhì)素原(POMC)、細胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白-3(SOCS3)、前蛋白轉(zhuǎn)化酶1(PC1)和2(PC2)、羧肽酶E(CPE)以及冷刺激下棕色脂肪組織中解偶聯(lián)蛋白(UCP1)的m RNA表達水平;
蛋白免疫印跡法(western blotting)檢測下丘腦中瘦素信號通路相關(guān)基因磷酸化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子-3(p-STAT3)和SOCS3的蛋白表達水平;免疫組化石蠟切片法(IHC-P)檢測兩組子代棕色脂肪組織中UCP1的相對表達。
參考文獻
[1]Male-lineage transmission of an acquired metabolic phenotype induced by grand-paternal obesity[J].Jennifer E.Cropley,Sally A.Eaton,Alastair Aiken,Paul E.Young,Eleni Giannoulatou,Joshua W.K.Ho,Michael E.Buckland,Simon P.Keam,Gyorgy Hutvagner,David T.Humphreys,Katherine G.Langley,Darren C.Henstridge,David I.K.Martin,Mark A.Febbraio,Catherine M.Suter.Molecular Metabolism.2016(8)
[2]Paternal Psychological Stress Reprograms Hepatic Gluconeogenesis in Offspring[J].Ling Wu,Yan Lu,Yang Jiao,Bin Liu,Shangang Li,Yao Li,Fengying Xing,Dongbao Chen,Xing Liu,Jiejie Zhao,Xuelian Xiong,Yanyun Gu,Jieli Lu,Xuejin Chen,Xiaoying Li.Cell Metabolism.2016
[3]Disruption of histone methylation in developing sperm impairs offspring health transgenerationally[J].Siklenka Keith,Erkek Serap,Godmann Maren,Lambrot Romain,McGraw Serge,Lafleur Christine,Cohen Tamara,Xia Jianguo,Suderman Matthew,Hallett Michael,Trasler Jacquetta,Peters Antoine H.F.M.,Kimmins Sarah.Science.2015(6261)
[4]Transgenerational epigenetic programming via sperm microRNA recapitulates effects of paternal stress[J].Rodgers Ali B.,Morgan Christopher P.,Leu N.Adrian,Bale Tracy L..Proceedings of the National Academy of Sciences.2015(44)
[5]石小琴.父代高血糖改變子代下丘腦攝食調(diào)節(jié)神經(jīng)通路加速肥胖形成的分子機制研究[D].重慶醫(yī)科大學,2017.