超快蛋白銀染試劑盒簡介^[1]

蛋白快速銀染試劑盒(Protein Fast Silver Stain kit)堤一種快速的可用于 SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白銀染染色的試劑盒，該試劑盒含有增敏步驟，可明顯降低背景。

優(yōu)點

1、操作簡單、快速;

2、可用于2D凝膠的銀染，并可進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)譜檢測;

3、目的條帶清晰;

4、不含甲醇。Protein Fast Silver Stain Kit與Protein Silver Stain Kit相比，前者操作速度更快，但檢測靈敏度可能低于后者，尤其是在檢測小分子量蛋白質(zhì)的時候。

試劑盒組成

操作步驟^[1]

1、 準(zhǔn)備工作:以下操作以8.5X5.5cm、厚度為1.0mm的凝膠為例， 以凝膠全部浸沒到溶液為準(zhǔn)，-般用量是25ml,對于凝膠體積較大的，各溶液的使用量需按凝膠體積比例放大。整個銀染過程應(yīng)在搖床上進(jìn)行，搖床轉(zhuǎn)速控制在60~70rpm。提前配制固定液，即按無水乙醇:冰乙酸:去離子水=5:1:4的比例配制。提前配制洗滌液，即按無水乙醇:去離子水=1:4的比例配制。

2、水洗: 電泳結(jié)束后，取凝膠放入去離子水中清洗2次，每次5min。

3、固定: 取凝膠放入50~100ml固定液中，在搖床上室溫?fù)u動15~20min,重復(fù)固定步驟1次。

4、洗脫: 取凝膠放入洗滌液中清洗2次，每次5min.

5、 水洗:去離子水清洗凝膠2次，每次5min。

6、增敏: 配制銀染增敏工作液，即取Silver Stain Sensitizer (500X) 0. 1ml加入到50ml去離子水中，混勻，即1XSi1ver Stain Sensitizer, 一般應(yīng)2h內(nèi)用完。室溫下用1XSi1ver Stain Sensitizer孵育凝膠2min,立即用去離子水清洗凝膠2次，每次1min。

7、 銀染:配制銀染工作液，即取Silver Stain(100x)0. 5ml加入到50ml去離子水中，混勻，即得1XSilver Stain， 一般應(yīng)2h內(nèi)用完。取凝膠入1XSilver Stain, 在搖床上室溫?fù)u動10~20min.

8、 水洗:棄液，在搖床上用去離子水清洗凝膠2次，每次30s， 搖動速度在60~70rpm.總的水洗時間應(yīng)控制在1. 5min內(nèi)。

9、顯影:配制銀染顯影工作液，即取Silver Stain Developer(5X)10ml加入到40ml去離子水中，混勻，即1XSilver Stain Developer, -般應(yīng)30min內(nèi)用完。清洗凝膠后，立即置于1XSilver Stain Developer 中，室溫孵育2~10min，直至蛋白條帶清晰可見。一般顯色30s后就會出現(xiàn)棕色沉淀，繼續(xù)顯影2~3min,亦可延長至5min以上，如果顯影效果不佳，可重新更換1XSi1ver Stain Developer繼續(xù)顯影。

10、迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過度，背景染色。立即加入銀染終止液，搖床上搖動10min，以終止顯色反應(yīng)。(配制銀染終止液，即取Silver Stain Stop Buffer (10 X)10ml加入到40ml去離子水中，混勻，即1XSilver Stain Stop Buffer，-般應(yīng)24h內(nèi)用完。)

11、保存:棄終止液，加入去離子水50ml, 搖床上搖動2~5min, 棄液。短期保存于新鮮去離子水，長期保存可以制備干膠。

主要參考文獻(xiàn)

[1] 陳宏  王振英  靳陽  陳瑩  付富友  彭永康  ；用超敏感銀染SDS-PAGE方法繪制黃瓜、菜豆蛋白質(zhì)指紋圖譜?！度A北農(nóng)學(xué)報》 2000年04期。