背景[1-3]
2'-5'-寡腺苷酸合成酶2抗體是可以特異性結(jié)合2'-5'-寡腺苷酸合成酶2的一種單克隆免疫球蛋白。2'-5'-寡腺苷酸合成酶2是以ATP為底物，在雙鏈RNA的激活下合成以2′，5′-磷酸二酯鍵連接寡腺苷酸(2~5 A)的酶。寡腺苷酸可以與核糖核酸酶L結(jié)合使之被激活，降解RNA，從而抑制蛋白質(zhì)的合成。該酶在干擾素誘導(dǎo)下形成，因而是干擾素抗病毒和抗腫瘤過程中的一個(gè)關(guān)鍵酶。
圖：抗2'，5'-寡腺苷酸合成酶2的單克隆抗體
在分子生物學(xué)中，2'-5'-寡腺苷酸合成酶是抗病毒酶，它通過降解病毒和宿主RNA來抵消病毒攻擊。該酶在2'-特異性核苷酸轉(zhuǎn)移反應(yīng)中使用ATP來合成2'-5'-寡腺苷酸，激活潛伏的核糖核酸酶（RNASEL），導(dǎo)致病毒RNA的降解和病毒復(fù)制的抑制。干擾素作用于靶細(xì)胞膜表面的受體后,通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)誘導(dǎo)一系列抗病毒蛋白產(chǎn)生,干擾病毒復(fù)制以達(dá)到抗病毒目的。2'-5'寡聚腺苷酸合成酶(2'-5'oligoadenylate synthetase,OAS)是干擾素作用于細(xì)胞后產(chǎn)生的一種重要的抗病毒蛋白,幾十年來,國內(nèi)外學(xué)者對OAS家族及其抗病毒機(jī)制進(jìn)行了大量研究并取得了一定的進(jìn)展,OAS被dsRNA激活后,催化生成2-5A,2-5A激活核酸內(nèi)切酶RNase L,降解病毒RNA,阻斷病毒蛋白合成,從而發(fā)揮抗病毒作用。
應(yīng)用[4][5]
用于2’-5’寡腺苷酸合成酶基因啟動(dòng)子介導(dǎo)的重組Caspase-3治療系統(tǒng)誘導(dǎo)表達(dá)HCV核心蛋白HepG2細(xì)胞凋亡的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
通過動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)確定2’-5’寡腺苷酸合成酶(2’-5’Oligoadenylate synthetase,OAS)基因啟動(dòng)子介導(dǎo)的重組型Caspase-3治療系統(tǒng)誘導(dǎo)表達(dá)HCV核心蛋白的HepG2細(xì)胞凋亡的特異性。方法：首先將pcDNA3.1-HCV-core-EGFP轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,建立穩(wěn)定表達(dá)HCV核心蛋白的細(xì)胞系。然后將轉(zhuǎn)染HCV核心蛋白表達(dá)質(zhì)粒和未轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞接種裸鼠皮下,待形成腫瘤后,將半乳糖基-殼聚糖-聚乙烯亞胺(galactosylated chitosan-graft-polyethyleneimine,GC-PEI)包被的pcDNA3.1-re-Caspase-3質(zhì)粒(陽性對照)、pGL3-OAS-re-Caspase-3質(zhì)粒和空白質(zhì)粒pcDNA3.1(陰性對照)注入裸鼠皮下腫瘤,48小時(shí)后處死動(dòng)物,取腫瘤。利用HCV核心蛋白抗體檢測腫瘤組織中HCV核心蛋白的表達(dá)及陽性細(xì)胞率。利用抗人的Caspase-3單克隆抗體和HCV核心蛋白抗體對腫瘤組織進(jìn)行免疫熒光雙標(biāo)記檢測,觀察導(dǎo)入的重組Caspase-3基因和HCV核心蛋白的表達(dá)。TUNEL技術(shù)檢測HepG2細(xì)胞的凋亡率。透射電鏡觀察HepG2細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變。
參考文獻(xiàn)
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[5]資源.2'-5'寡腺苷酸合成酶基因啟動(dòng)子介導(dǎo)的重組Caspase-3治療系統(tǒng)誘導(dǎo)表達(dá)HCV核心蛋白HepG2細(xì)胞凋亡的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)[D].中南大學(xué),2010.