概述^[1]

廣金錢草為豆科山螞蝗屬植物，其藥用部位為干燥地上部分，主要化學(xué)成分為黃酮、皂苷、多糖、生物堿等化合物。其具有清熱除濕，利尿通淋之功效，用于熱淋、沙淋、石淋、小便澀痛、水腫尿少、黃疸尿赤、尿路結(jié)石。二氫菜豆酸為白色粉末，其廣泛存在于廣金錢草藥材中，作為廣金錢草鑒別和含量測定用的對照品，以及廣金錢草及其相關(guān)藥物制劑質(zhì)量控制用?，F(xiàn)有提取分離二氫菜豆酸的方法和系統(tǒng)亟待改進(jìn)。

制備^[1]

二氫菜豆酸制備如下：

1）原料：選用豆科植物廣金錢草45000-50000重量份，切成5-10cm小段，飲用水清洗掉泥沙，瀝干，投料。

2）乙醇提?。?0％乙醇回流提取兩次，次12倍量2h，第二次10倍量1.5h；合并兩次醇提液，回收乙醇至無醇味。

3）減壓濃縮：提取濃縮液加水稀釋至藥材重量的5倍體積；200目濾布過濾；得上柱液；將事先用95％乙醇處理過的凈品樹脂裝柱，純化水替換；將上柱液用泵打入柱中，吸附，控制流速0.5-1倍BV/h，吸附完畢后，靜置2h；用純化水沖洗，洗脫流速3-4BV/h，洗脫量10BV；再用60％乙醇洗脫，洗脫流速2-3BV/h，洗脫量5BV；60％洗脫液合并，打入濃縮罐，回收乙醇至無醇味，至真空干燥箱中50-70℃干燥，得廣金原料藥300-400重量份。

4）三級色譜分離

A：將廣金原料藥300-400重量份用AB-8大孔樹脂色譜分離，即色譜分離I：乙醇-水混合溶劑20：80，30:70，40:60，60:40梯度洗脫，每個梯度沖到無顏色即可，合并各流份得20％，30％，40％，60％共四個部位。

B：將色譜分離I得到的20％部位用ODS反相中壓色譜分離，即色譜分離Ⅱ：用乙醇-水，條件為15％等度300min，15-35％梯度200min洗脫，按照色譜圖出峰順序，分份收集，每100-150體積份收集一份，共收集40-50個流份，高效液相色譜檢識后合并相同流份；色譜分離Ⅱ得到的30-40流份合并，進(jìn)一步用ODS反相中壓色譜分離，即色譜分離Ⅲ，用乙醇-水，條件為10％等度30min，10-18％梯度200min洗脫，按照色譜圖出峰順序，分份收集，每100-150體積份收集一份，共收集35-45個流份，高效液相色譜檢識后合并相同流份。

C：將色譜分離Ⅲ得到的第26-35流份合并，減壓濃縮以及放置析出得到二氫紅花菜豆酸粗品(純度為90％)。最后用凝膠色譜分離，即色譜分離Ⅳ：將二氫紅花菜豆酸粗品加入至甲醇-水(體積比為2:1)中，超聲溶解，所選凝膠色譜為葡聚糖凝膠色譜SephadexG-10，進(jìn)樣體積為10毫升，用純甲醇沖柱，分份收集，每5體積份收集一份，共收集20-30個流份，高效液相色譜檢識后合并相同流份；色譜分離Ⅳ得到的第8-18流份合并，回收溶劑得到白色的粉末。

5）結(jié)構(gòu)鑒定

經(jīng)電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)和光譜法(H1-NMR和C13-NMR)對得到白色粉末進(jìn)行鑒定，結(jié)合ESI-MS、H1-NMR和C13-NMR譜圖信息推斷該化合物的分子式為C15H22O5，確定上述從廣金錢草中提取分離出白色粉末為二氫菜豆酸，經(jīng)HPLC純度檢驗(yàn)，純度達(dá)到98％以上，可作為廣金錢草鑒別和含量測定用的對照品、以及作為廣金錢草及其相關(guān)藥物制劑的質(zhì)量控制使用。

主要參考資料

[1] (CN104945355)從廣金錢草中提取分離二氫紅花菜豆酸的方法和系統(tǒng)