"PE/CA-PJ34 (clone C12) Cell|人口腔鱗狀細胞癌細胞
細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
細胞形態(tài):上皮細胞樣
體內細胞培養(yǎng)及其操作步驟:【瘤細胞懸液接種】1)無菌選取生長良HAO(有光澤,淡紅色)瘤組織或對數(shù)生長期培養(yǎng)瘤細胞;2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨,經80~100目篩網過濾成細胞懸液;3)培養(yǎng)細胞應用PBS洗兩遍;4)計數(shù)并調整細胞濃度至107~108/ml;5)常規(guī)消毒后,于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml/部位,>106細胞)。初次接種成功率低,細胞數(shù)盡可能多一些;6)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期,以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短,Zui后固定為一個相對穩(wěn)定的時間?!靖顾龅慕⑴c腹水瘤的接種】將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤細胞,將這種腹水反復傳代,即可成為腹水瘤。初次傳代時,腹水常呈血性(含大量紅細胞),反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細胞離心和洗滌,進行細胞計數(shù);2)消毒動物,左下腹穿刺接種106腹水瘤細胞;3)接種腹水瘤細胞后約7~12d,待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9號針頭抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml;4)抽取的腹水經3000rpm離心15min,收集上清,分裝凍存?zhèn)溆谩?/p>
細胞生長:貼壁
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細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
PE/CA-PJ34 (clone C12) Cell|人口腔鱗狀細胞癌細胞
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
細胞培養(yǎng)時分布不均勻,通常操作步驟:做細胞生物學實驗,細胞鋪板大概是我們Zui常見的一個實驗。但有時候鋪得不是很均勻:要么中間密周圍稀,要么周圍密中間禿。下面為大家分享幾點經驗。盡量消化細胞分散成單細胞懸液。對于易于消化的細胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶潤洗一遍(25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板),棄掉胰酶,37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右,鏡下觀察是否細胞消化較為分散。如果不夠,延長消化時間。96孔板一般以100微升每孔接種,直接用100微升移液器吸取細胞懸液,沿孔壁(稍離開一點孔底即可,不要離底太GAO)直接接入,移液器不需完全打到Zui大,輕輕按下即可,每鋪完一行換一次槍頭同時輕輕混勻細胞懸液。都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度(我一般輕巧敲三下),太強或次數(shù)太多會導致細胞集中成堆,將板順時針旋轉(逆時針效果不HAO),依次敲擊剩余三個邊,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱。6孔板、12孔板或24孔板,可采用將每個孔加入少量無血清培養(yǎng)基,晃動浸潤整個孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤孔底,其它孔依此類推,這樣整個孔底都是濕潤的,細胞懸液會平鋪在整個孔底,注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這個方法就是有點慢,但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式,但力度沒有96孔板HAO掌握,效果沒有96孔板HAO。培養(yǎng)瓶里面加HAO細胞以后(比如傳代HAO/分HAO細胞以后),先順時針搖晃3次,馬上逆時針搖晃3次。然后延X軸Y軸分別水平搖動3次。放入CO2培養(yǎng)箱后,平放著培養(yǎng)瓶重復延X軸Y軸分別水平搖動3次。
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細胞傳代方法:1:2傳代
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:貼壁生長
細胞系永生化原理介紹:多數(shù)正常細胞的壽命是有限的,能傳20-100代,但有些細胞,尤其是來自嚙齒類或來自多數(shù)腫瘤的細胞,可以產生具有無限壽命的連續(xù)細胞系。嚙齒類動物細胞在分離時核型是正常的,在傳到12代左右以后可能出現(xiàn)危相,多數(shù)細胞在這個階段死亡了,但少數(shù)細胞存活下來,并擁有了更GAO的生長率,成為連續(xù)細胞系。目前認為永生化是一個多步驟的過程,包括一系列細胞周期的調節(jié)基因(如Rb和p53)失活。目前主要從兩個方向進行操作,病毒基因致永生化和端粒酶誘導的永生化,其原理如下:SV40 LT基因常用于誘導永生化。這個基因的產物-T抗原,可與Rb和p53結合。這樣不僅使細胞增殖的壽命得以延長,同時也限制了如p53這樣基因的DNA監(jiān)控活性,從而使基因組的不穩(wěn)定性增加,也增加了向永生化發(fā)展的進一步突變的機會(如上調端粒酶或下調端粒酶抑制物的活性)。用含可調節(jié)啟動子的端粒酶基因進行轉染,足以形成永生化細胞。這些基因中已被廣泛應用的有:EBV用于淋巴母細胞樣細胞;SV40 LT用于黏附細胞,如成纖維細胞(Mayne et al., 1996)、 角質形成細胞(Steinberg,1996) 和內皮細胞(Punchard et al.,1996)等;而hTERT則用于間充質干細胞和其他一些細胞。
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PE/CA-PJ34 (clone C12) Cell|人口腔鱗狀細胞癌細胞
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關鍵字: PE/CA-PJ34 (clone C1;
上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。