雙重探針法人類脲原體實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒

Duplex Probe Real-time PCR Kit for Ureaplasma parvum & Ureaplasma urealyticum

貨號(hào)：Mqt-upr-20      規(guī)格：20個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqt-upr-50      規(guī)格：50個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqt-upr-100     規(guī)格：100個(gè)反應(yīng)

儲(chǔ)存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點(diǎn)：

1，  特異性檢測并區(qū)分微小脲原體和解脲脲原體，可識(shí)別人類脲原體的全部十四種血清型，與其他生物基因組沒有交叉反應(yīng)。

2，  使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力強(qiáng)和熱穩(wěn)定性好的特點(diǎn)；采用熱啟動(dòng)方式，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

3，  帶有陽性對照樣品（組分C），可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性。

4，  帶有dUTP和UDG酶，可降低殘留DNA的污染。

脲原體（Ureaplasma）是一類具有尿素分解能力的支原體，呈球狀或球桿狀，革蘭氏陽性，克隆呈煎蛋狀，細(xì)胞直徑在0.1到1.0 μm 之間，于1954年首次從人類泌尿生殖道分離出來，1974年首先被命名為解脲脲原體（Ureaplasma urealyticum），人類中目前已知有14種血清型。經(jīng)過多年的爭論，在2002年，根據(jù)基因組大小、16S rRNA基因序列、16S-23S rRNA基因間隔區(qū)序列、酶的多態(tài)性、DNA-DNA雜交、對錳的分化反應(yīng)、多帶抗原基因等，將其區(qū)分為兩種生物：解脲脲原體和微小脲原體（Ureaplasma parvum）。區(qū)分后的解脲脲原體包含的血清型有十種：2、4、5、7、8、9、10、11、12和13，微小脲原體包含的血清型有四種：1、3、6和14。不同血清型對人體疾病的影響目前尚沒有一致結(jié)論。這兩種脲原體是健康人常見的泌尿生殖道共生菌，可以單獨(dú)或共同存在，有時(shí)也會(huì)與一些疾病相關(guān)聯(lián)，如：尿道炎、產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎、絨毛膜羊膜炎、自然流產(chǎn)、早產(chǎn)、低出生體重、肺炎、菌血癥、腦脊膜炎和早產(chǎn)兒慢性肺病等。目前尚不清楚這些脲原體會(huì)在什么情況下引起疾病，體液免疫系統(tǒng)健全的人一般不會(huì)受其影響。

脲原體的體外培養(yǎng)非常困難，耗時(shí)較長，靈敏度較低。對脲原體的分型是依靠針對全細(xì)胞或純化抗原的單克隆或多克隆抗體，實(shí)驗(yàn)方法包括：生長抑制實(shí)驗(yàn)、代謝抑制實(shí)驗(yàn)、免疫熒光、免疫過氧化物酶、ELISA、免疫印跡等，這些方法都比較耗時(shí)費(fèi)力，結(jié)果常常難以重復(fù)，有很多交叉反應(yīng)，在含有多個(gè)血清型的樣本上常難以區(qū)分。而PCR法用于檢測脲原體，則有更高的靈敏度和更好的特異性，不受其他微生物污染的影響，且檢測時(shí)間短，僅需幾個(gè)小時(shí)即可獲得結(jié)果。定量PCR法與常規(guī)PCR法相比，不僅可以精確定量，而且操作更為方便，更少受環(huán)境污染的影響。

本試劑盒選擇脲原體特征性的尿素酶基因作為靶點(diǎn)，將脲原體14種血清型的序列進(jìn)行比對，設(shè)計(jì)引物和探針，特異性識(shí)別并區(qū)分解脲脲原體和微小脲原體。使用本試劑盒可以準(zhǔn)確區(qū)分脲原體14種血清型的生物分類，經(jīng)BLAST驗(yàn)證，與其他生物基因組沒有交叉反應(yīng)。對42個(gè)分離培養(yǎng)樣本進(jìn)行檢測，得到37個(gè)微小脲原體陽性，4個(gè)解脲脲原體陽性，以及一個(gè)雙重陽性，與測序結(jié)果完全一致。對31個(gè)臨床拭子樣本進(jìn)行檢測，獲得11個(gè)微小脲原體陽性，6個(gè)解脲脲原體陽性，與常規(guī)PCR法檢測結(jié)果一致，陽性率高于體外培養(yǎng)法，顯示本試劑盒靈敏度高于體外培養(yǎng)法。

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