支原體污染PCR檢測試劑盒
PCR Detection Kit for Mycoplasma Contamination
貨號 | 規(guī)格 |
Myco-P-20 | 20次反應 |
Myco-P-50 | 50次反應 |
Myco-P-100 | 100次反應 |
支原體污染PCR檢測試劑盒，用于檢測細胞培養(yǎng)中的支原體污染，可檢測屬于柔膜菌綱(Mollicutes)的支原體、脲原體、無膽甾支原體、螺原體、蟲原體、中間原體等超過一百種，與柔膜菌綱以外的其他微生物沒有特異性反應。
支原體是一種直徑約為0.1-0.3 μm、無細胞壁的原核生物，具有變形能力，屬于柔膜菌綱，常被用作柔膜菌綱的統(tǒng)稱。支原體是最小的具有完整細胞結構的生物，可透過常見過濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除，靶向細胞壁的抗生素也對支原體無效。支原體種類繁多，通常為寄生性或腐生性，有些種類可作為正常共生菌存在，有些種類具有致病性，還有一些種類具有細胞侵入性。
支原體污染是基礎研究和工業(yè)生產(chǎn)中一個很常見的問題，據(jù)報導，有5-35%的細胞株受到污染；一些實驗室由于對此不夠重視，實際可能有高達80%以上的細胞株發(fā)生支原體污染。支原體在光學顯微鏡下不可見，對培養(yǎng)基的需求有限，一般不會引起培養(yǎng)物混濁，因此細胞被支原體污染一般難以察覺。支原體污染能消耗營養(yǎng)物，促進代謝積累，導致pH改變，誘導或抑制細胞因子表達，并改變培養(yǎng)細胞的代謝、增殖特征及形態(tài)。由于支原體污染能影響幾乎每一個細胞參數(shù)，所以很多研究都強調常規(guī)檢測正在培養(yǎng)的細胞，以確保觀察到的結果不被支原體污染所損害。
目前已知的支原體種類約200種，污染細胞培養(yǎng)物的支原體種類有20多種。其中95%的污染是由五種支原體引起：精氨酸支原體（Mycoplasma arginini），發(fā)酵支原體（Mycoplasma fermentans），豬鼻支原體（Mycoplasma hyorhinis），口腔支原體（Mycoplasma orale）和萊氏無膽甾原體（Acholeplasma laidlawii）。精氨酸支原體和萊氏無膽甾原體為牛源性，主要由牛血清帶入；豬鼻支原體主要由胰酶（通常來源于豬）帶入；發(fā)酵支原體和口腔支原體為人源性，主要由實驗操作人員帶入，人源性的支原體污染還包括唾液支原體和人型支原體。原代細胞的支原體污染占比不到1%，但是種類最多，已知有17種支原體，主要為鼠、禽和犬來源的支原體，如雞毒支原體（Mycoplasma gallisepticum）、關節(jié)炎支原體（Mycoplasma arthritidis）、肺支原體（Mycoplasma pulmonis）、犬支原體（Mycoplasma canis）等，一般是從原始的動物組織中帶入進來，因此種類比較多，并且有不確定性。歐洲藥典（EUROPEAN PHARMACOPOEIA）2.6.7指定了六種需檢測的支原體：萊氏無膽甾原體，雞毒支原體，豬鼻支原體，口腔支原體，肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae）和滑液支原體（Mycoplasma synoviae）。由上述內容可知，引起細胞污染的支原體種類較為繁雜，并且可能存在未知種類，因此使用支原體通用性PCR引物更適合檢測支原體污染的需要，可以避免使用物種特異性引物可能導致的漏檢情況。
目前美國、歐洲、日本的藥典仍然推薦體外培養(yǎng)法作為檢測支原體污染的金標準。培養(yǎng)法通過使用選擇性培養(yǎng)基，可以達到很強的特異性，并且有很高的靈敏度，但是其缺點在于操作比較繁瑣，且耗時較長，完成一個完整的檢測需28天之久。對于大多數(shù)實驗而言，這是一個不可承受的時間成本。PCR檢測由于其特異性強、靈敏度高，且快速的特點，成為培養(yǎng)法的良好替代方案，正逐漸被世界各國所接受。
本試劑盒采用支原體通用性引物，可檢測上述提及的全部支原體，最低檢測極限（LOD，100%檢出時的最低模板濃度）為反應液中10個支原體基因組，能在2到3小時內獲得可靠的結果，是一種靈敏度高、特異性強、快速的檢測支原體污染的方法，具有以下特點： ①特異性引物是針對高度保守的支原體16S rRNA序列設計的，可用于檢測非常廣泛的支原體種類，不受真核細胞或細菌DNA干擾。經(jīng)本試劑盒測試的支原體菌株涵蓋了所有常見的支原體污染種類； ②靈敏度極高，最低檢測極限僅需10個拷貝的支原體基因組； ③陽性對照所用引物與支原體檢測相同，可幫助判斷假陰性現(xiàn)象，避免假陰性導致的誤判； ④包含PCR反應所需的所有成分，只需進行一次PCR反應，降低了交叉污染的幾率，使用方便。
由于支原體污染比較隱蔽，所以建議給細胞定期做支原體檢測，以免在未察覺的情況下給您的實驗造成影響?？晒﹨⒖嫉淖龇ㄊ牵涸谛录毎M入實驗室時，以及細胞凍存入庫前，都應該做一下支原體檢測，平時每三個月常規(guī)檢測一次。
如發(fā)現(xiàn)支原體污染，可用我公司的支原體清除劑進行清除。支原體清除劑采用雙重殺菌機制，不易耐藥。
本產(chǎn)品僅供科學研究使用。
我司可提供數(shù)十種支原體的種類鑒定和檢測，詳情請咨詢我司客服。
支原體名稱 | 主要宿主 | 支原體名稱 | 主要宿主 |
支原體污染 | 細胞培養(yǎng)物 | 豬肺炎支原體 | 豬 |
豬鼻支原體 | 豬 |
雞毒支原體 | 雞 | 豬滑液支原體 | 豬 |
滑液支原體 | 雞 | 絮狀支原體 | 豬 |
衣阿華支原體 | 鳥類 | 豬支原體 | 豬 |
火雞支原體 | 火雞 | 羊附紅細胞體 | 羊 |
關節(jié)炎支原體 | 鼠 | 無乳支原體 | 羊 |
肺支原體 | 鼠 | 山羊支原體山羊肺炎亞種 | 羊 |
生殖支原體 | 人 | 結膜支原體 | 羊 |
人形支原體 | 人 | 綿羊肺炎支原體 | 羊 |
穿透支原體 | 人 | 腐敗支原體 | 羊 |
肺炎支原體 | 人 | 絲狀支原體屬（通用） | 羊，牛 |
唾液支原體 | 人 | 萊氏無膽甾支原體 | 羊，牛 |
人類脲原體 | 人 | 絲狀支原體絲狀亞種 | 牛 |
解脲脲原體 | 人 | Mycolasma leachii | 牛 |
微小脲原體 | 人 | 維容氏支原體 | 牛 |
犬支原體 | 犬 | 牛生殖道支原體 | 牛 |
愛德華支原體 | 犬 | 差異脲原體 | 牛 |
貓血支原體 | 貓 | 牛支原體 | 牛 |
Candidatus Mycoplasma haemominutum | 貓 | 嗜血支原體通用 | 各種哺乳動物血液 |
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關鍵字： 支原體污染;支原體檢測;細胞污染;支原體PCR;
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