熒光染料的優(yōu)點:
使用簡便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合;
價格便宜;
熒光染料的缺點:
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決。
總的來說,SYBR Green I方法是一種最基礎也最常用的Real-time qPCR實驗手段。
產(chǎn)品名稱 |
隱襲腐霉探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 |
Pythium insidiosum |
貨號 |
XGR97153 |
熒光化學物質(zhì):
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料?,F(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的首選技術平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
人多藥耐藥相關蛋白1(MRP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 別稱:ABCC1, ABC29, ABCC, GS-X, MRP, MRP1, ATP binding cassette subfamily C member 1 Human MRP1(Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit 用途 該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組MRP1濃度
ReagentPack Subculture Reagents Clonetics media KT
FGM BulletKit (CC-3131 & CC-4134) Clonetics media KT
Trypsin/EDTA Solution 100 ml Clonetics media BOT
OBM Basal Medium Medium, 500 ml Clonetics media BOT
MsBM Basal Medium 500 ml Clonetics media BOT
喹諾酮類藥物殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cefozopran hydrochloride1139814鹽酸頭孢唑蘭
萊克多巴胺殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cefotaxime 644853頭孢噻肟鈉
氯霉素殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cefixime7937頭孢克肟
克侖特羅殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Cefcapene pivoxil hydrochloride1478164鹽酸頭孢卡品酯
呋喃妥因代謝物殘留酶聯(lián)免疫檢測試劑盒Caudatin383952告達庭
4-Hydroxysapriparaquinone 120278-25-3 中文名: 分子式:C20H26O4 兔子內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Phyllostine 27270-89-9 中文名: 分子式:C7H6O4 Rat thrombospondin / thrombin sensitive protein 1 (TSP-1) ELISA Kit 大鼠血小板反應蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒
2-Methoxystypandrone 85122-21-0 中文名: 分子式:C14H12O5 Humanimmunoglobulinheavychainvariableregion,IgHVELISAKit 人球蛋白重鏈可變區(qū)(IgHV)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
隱襲腐霉探針法熒光定量PCR試劑盒Lapachol 84-79-7 中文名:拉帕醇 分子式: HumandysophinELISA試劑盒人肌養(yǎng)蛋白(dysophin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Deoxylapachol 3568-90-9 中文名: 分子式:C15H14O2 組織P38β2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
關鍵字: 隱襲腐霉探;探針法;熒光定量PCR試劑盒;Pythium insidiosum;XGR97153;
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