二硫蘇糖醇是一種常用還原劑,又叫二巰基蘇糖醇(簡稱DTT),具有很強(qiáng)的還原性,其還原性很大程度上是由于其氧化狀態(tài)六元環(huán)(含二硫鍵)的構(gòu)象穩(wěn)定性。還原力受pH值的影響,只在pH值大于7的情況下能夠發(fā)揮還原作用。這是因為只有脫去質(zhì)子的硫醇鹽負(fù)離子(-S–)才具有反應(yīng)活性,硫醇(-SH)則沒有;而巰基的pKa一般為~8.3。 二硫蘇糖醇對一個典型的二硫鍵的還原是由兩步連續(xù)的巰基-二硫鍵交換反應(yīng)所組成:其中,步反應(yīng)所形成的中間態(tài)很不穩(wěn)定,因為DTT上的第二個巰基趨向于與被氧化的硫原子連接,使中間態(tài)很快被轉(zhuǎn)化為DTT的環(huán)狀氧化結(jié)構(gòu),從而完成對二硫鍵的還原。由于容易被空氣氧化,因此二硫蘇糖醇(DTT)的穩(wěn)定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長它的使用壽命。由于質(zhì)子化的硫的親核性較低,隨著pH值的降低,DTT的有效還原性也隨之降低;而Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP鹽酸鹽)可以作為低pH值條件下DTT的替代品,而且也比DTT更為穩(wěn)定。
DTT是一種小分子氧化還原試劑
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