RAW 264.7 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞描述

此細(xì)胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖?？梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對腫瘤靶細(xì)胞無作用。

細(xì)胞特性

1） 來源：鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；單核細(xì)胞；巨噬細(xì)胞

2） 形態(tài)：不規(guī)則圓形，紡錘狀，傳代時密度要大，易分化

3） 含量：>1x106 個

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細(xì)胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞接收后的處理

1） 收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4） 貼壁細(xì)胞：在運輸過程中貼壁細(xì)胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。                     

RAW 264.7 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一． 培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1) 準(zhǔn)備:DMEM(包含2mM  L-谷氨酰胺，0.11g / L 丙酮酸鈉)(推薦iCell-0001) 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%；P/S  1%

注意：DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基時要確認(rèn)下培養(yǎng)基中谷氨酰胺、丙酮酸鈉是否添加，如果沒有添加，在培養(yǎng)細(xì)胞時技術(shù)人員要添加谷氨酰胺、丙酮酸鈉。傳代時密度要大，易分化。

2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

該細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟替代胰酶來對細(xì)胞進行處理。（注：傳代時，吸走部分培養(yǎng)液，留下少許培養(yǎng)液（如T75培養(yǎng)瓶留下10ml），用無菌細(xì)胞刮鏟刮拭細(xì)胞附著培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落，收集細(xì)胞后離心去上清，重懸后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)或?qū)?xì)胞進行凍存）。

沒有準(zhǔn)備細(xì)胞刮鏟的客戶可以采用胰酶消化來處理，

1. 該細(xì)胞比較難消化，同時用胰酶消化來處理細(xì)胞對細(xì)胞傷害較大。

2. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

3. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

4. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

5. 將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6-8ml培養(yǎng)基的T25瓶中培養(yǎng)。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為類；

1，細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟替代胰酶來對細(xì)胞進行處理。（注：傳代時，吸走部分培養(yǎng)液，留下少許培養(yǎng)液（如T75培養(yǎng)瓶留下10ml），用無菌細(xì)胞刮鏟刮拭細(xì)胞附著培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落。 

2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，過夜（至少4個小時）以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。