RAW 264.7 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞描述
此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性?？梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖?？梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。
細胞特性
1） 來源：鼠科白血病病毒誘導的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞
2） 形態(tài)：不規(guī)則圓形，紡錘狀，傳代時密度要大，易分化
3） 含量：>1x106 個
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式
（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；
（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞接收后的處理
1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。
6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。
RAW 264.7 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞培養(yǎng)步驟
一． 培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1) 準備:DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺，0.11g / L 丙酮酸鈉)(推薦iCell-0001) 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%；P/S 1%
注意：DMEM基礎培養(yǎng)基時要確認下培養(yǎng)基中谷氨酰胺、丙酮酸鈉是否添加，如果沒有添加，在培養(yǎng)細胞時技術人員要添加谷氨酰胺、丙酮酸鈉。傳代時密度要大，易分化。
2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
該細胞用細胞刮鏟替代胰酶來對細胞進行處理。（注：傳代時，吸走部分培養(yǎng)液，留下少許培養(yǎng)液（如T75培養(yǎng)瓶留下10ml），用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yǎng)表面將細胞刮落，收集細胞后離心去上清，重懸后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)或?qū)毎M行凍存）。
沒有準備細胞刮鏟的客戶可以采用胰酶消化來處理，
1. 該細胞比較難消化，同時用胰酶消化來處理細胞對細胞傷害較大。
2. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
3. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
4. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
5. 將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6-8ml培養(yǎng)基的T25瓶中培養(yǎng)。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為類；
1，細胞用細胞刮鏟替代胰酶來對細胞進行處理。（注：傳代時，吸走部分培養(yǎng)液，留下少許培養(yǎng)液（如T75培養(yǎng)瓶留下10ml），用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yǎng)表面將細胞刮落。
2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，過夜（至少4個小時）以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。