糖基化,尤其是N-糖基化修飾是生物體調(diào)控蛋白質(zhì)在組織和細(xì)胞中的定位、功能、活性、壽命和多樣性的一種普遍的翻譯后方式。N-糖基化位點(diǎn)研究是理解糖鏈功能的重要前提之一。在N-糖基化相關(guān)的信息中,發(fā)生N-糖基化的位點(diǎn)是我們理解其糖鏈功能的基礎(chǔ)。除了傳統(tǒng)生物化學(xué)中應(yīng)用點(diǎn)突變等方法對(duì)糖基化位點(diǎn)進(jìn)行研究,生物質(zhì)譜技術(shù)也在N-糖基化位點(diǎn)的鑒定中發(fā)揮了重要作用。MALDI TOF MS及nano LC-ESI-MS/MS常用于抗體中N-/O-糖基化位點(diǎn)的鑒定。百泰派克具有MALDI TOF MS及nano LC-ESI-MS/MS兩項(xiàng)質(zhì)譜分析技術(shù),提供高效精準(zhǔn)的包括蛋白質(zhì)、抗體在內(nèi)的生物藥物糖基化鑒定服務(wù)。在收取樣品后,我們首先對(duì)樣品進(jìn)行酶切,釋放抗體的Fc domain和Fab,然后對(duì)糖基化片段進(jìn)行分離,通過MALDI TOF MS或nano LC-ESI-MS/MS對(duì)糖基化位點(diǎn)進(jìn)行確證。
(1) 使用trypsin或其他適當(dāng)?shù)牡鞍酌笇?duì)樣品進(jìn)行酶切; (2) 選取合適的色譜柱對(duì)N-glycopeptides, O-glycopeptides及其他多肽進(jìn)行分離; (3) 脫糖基化處理; (4) 通過MALDI-TOF MS, ESI-MS或MS/MS 對(duì)多肽圖譜進(jìn)行分析,找出糖基化的理論位置; (5) 通過多肽圖譜確定每一個(gè)N-/O-糖原的位點(diǎn); (6) 對(duì)不同批次樣品的糖基化位點(diǎn)進(jìn)行比對(duì)。
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