百泰派克生物結(jié)合MALDI-TOF質(zhì)譜系統(tǒng)與LC-MS/MS質(zhì)譜系統(tǒng),提供專業(yè)準確的蛋白膠點、膠條、IP樣品,CO-IP樣品蛋白鑒定服務(wù)??设b定的樣品包括:1D-SDS PAGE分離的蛋白膠條,2DE PAGE中的蛋白膠點,蛋白表達產(chǎn)物,免疫共沉淀(Co-IP)樣品。其中,蛋白質(zhì)樣品的鑒定前處理過程嚴格按照Nature Methods發(fā)表的文章:Universal sample preparation method for proteome analysis進行,保證鑒定試驗中得到更高的肽段覆蓋率。質(zhì)譜鑒定的原理則是基于鳥槍法(Shot-gun):將蛋白條帶或者蛋白溶液酶切成肽段混合物,經(jīng)高效液相色譜分離得到若干較為簡單的組分,進入高分辨率質(zhì)譜儀中進行分析。檢索軟件根據(jù)二級質(zhì)譜信息與相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫比對,結(jié)合匹配度打分及錯配過濾,可得到肽段的確切序列,進而拼接出各蛋白的完整序列,從而實現(xiàn)對蛋白的鑒定。
1D SDS PAGE /2D PAGE gels樣品: 1. Coomassie Blue, SYPRO Ruby 以及Silver stain樣品均可進行蛋白的鑒定試驗; 2. 銀染的樣品有可能與后續(xù)的質(zhì)譜分析不兼容,我們推薦您使用下面的產(chǎn)品或者實驗步驟進行銀染實驗: ProteoSilver Plus, Sigma (Product # PROTSIL1 or PROTSIL2) Dodeca Silver Stain, BioRad (Product # 161-0481 or 161-0480) 3. 銀染的樣品請不要進行脫色處理 液體樣品(In solution format): 1. 假如樣品中蛋白量>10ug,我們對樣品的緩沖體系沒有要求; 2. 假如樣品中蛋白量<10ug,樣品準備過程中盡量減少SDS等表面活性劑的使用,并注意降低鹽濃度; 3. 提交樣品過程中,注意提供樣品的緩沖體系和樣品中蛋白的預(yù)估含量; Co-IP樣品: 1. 如果您洗脫的樣品需要跑膠,請按照1D SDS PAGE樣品準備要求準備樣品即可; 2. 如果您直接提交洗脫樣品,我們推薦使用HPH EB (0.5 M NH4OH, 0.5 mM EDTA) 緩沖體系進行蛋白洗脫,保證洗脫緩沖體系與后續(xù)的質(zhì)譜實驗兼容; 樣品運輸: 1. 我們推薦您將樣品凍干后進行運輸,凍干樣品中蛋白非常穩(wěn)定。 2. 液體樣品推薦干冰運輸,短途運輸冰袋也可以。 注意事項: 利用質(zhì)譜進行蛋白樣品的鑒定,在樣品準備過程中需佩戴手套和頭套,盡量避免自身角蛋白(keratin)對樣品的污染。
在技術(shù)報告中,百泰派克會為您提供詳細的中英文雙語版技術(shù)報告,報告包括: 1. 實驗步驟(中英文) 2. 相關(guān)的質(zhì)譜參數(shù)(中英文) 3. 質(zhì)譜圖片 4. 原始數(shù)據(jù) 5. 鑒定的蛋白質(zhì)詳細信息
您只需下單-寄送樣品 百泰派克一站式服務(wù)完成:樣品處理-上機分析-數(shù)據(jù)分析-項目報告
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