"SU-DHL-4細(xì)胞:人彌漫性組織淋巴瘤細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:懸浮 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 細(xì)胞生長特性:懸浮 細(xì)胞傳代注意事項:①傳代培養(yǎng)時注意無菌操作并防止細(xì)胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作。每種細(xì)胞使用一套器材;②每天觀察細(xì)胞形態(tài),掌握好細(xì)胞是否健康的標(biāo)準(zhǔn):健康細(xì)胞的形態(tài)飽滿,折光性好,生長致密時即可傳代;③如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染跡象,應(yīng)立即采取措施,一般應(yīng)棄置污染的細(xì)胞,如果必須挽救,可加含有抗生素的BBS或培養(yǎng)基反復(fù)清洗,隨后培養(yǎng)基中加入較大量的抗生素,并經(jīng)常更換培養(yǎng)基。傳代細(xì)胞的建系和維持:細(xì)胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細(xì)胞種子凍存來實現(xiàn)。對每一個細(xì)胞系來說都有其自身的特點,要做好建系的維持必須記錄好細(xì)胞檔案,換液傳代和做好細(xì)胞系的管理工作。培養(yǎng)細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇:細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細(xì)胞凍存在-196℃液氮中,儲存時間幾乎是無限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融。 有一些細(xì)胞是數(shù)量多一點比較好生長,生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細(xì)胞。譬如內(nèi)皮細(xì)胞。而有一些是細(xì)胞是數(shù)量少一點細(xì)胞狀態(tài)會生長的比較好,譬如巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞。尤其是巨噬細(xì)胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應(yīng)該留很少量的細(xì)胞,這樣細(xì)胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細(xì)胞形態(tài)基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細(xì)胞的時候應(yīng)該摸索該細(xì)胞喜歡的生長空間密度問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細(xì)胞,如果細(xì)胞形態(tài)不好,(或者細(xì)胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進(jìn)行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進(jìn)行預(yù)吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細(xì)胞建議只吹打,不消化)其次,把吹打下來的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi),培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),按時間點觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長情況以及形態(tài)。通常稱之為“二傳”。如果一次效果還不理想,可重復(fù)多次。直到找到細(xì)胞上乘形態(tài)。其中要注意,結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細(xì)胞你就等貼壁細(xì)胞比較多點的時候再傳。反之亦然。 因為細(xì)胞生長的時候肯定是要相互聯(lián)系,大部分的細(xì)胞都是要成片生長的,尤其是對于貼壁細(xì)胞,單個細(xì)胞貼壁之后長著長著就長到一片去了。但是如果是成片的細(xì)胞抱團(tuán)的話,傳代后細(xì)胞是不能貼壁的,這樣抱團(tuán)的細(xì)胞就會死亡。所以,消化傳代的時候一定要將細(xì)胞消化成單個單個的獨立狀態(tài),這個啊是非??季磕愕墓Ψ虻?!細(xì)胞一旦脫落入懸液里你很難再將他吹打成單個,因為他沒有受力點了。很難找到受力點讓你對他吹打的力分散開細(xì)胞。所以必須要在細(xì)胞未脫落之前將其吹打開,受力點就是細(xì)胞貼壁的地方。這樣你就必須要嚴(yán)格控制好消化的程度啊,這和大師做飯掌握好火候是一樣的道理啊。既要消化到容易吹打下來,又不能太過,一吹就整片脫落,要單個單個地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是為了保證不同生長狀態(tài)貼壁程度的細(xì)胞能夠都維持在好的受力點分散開。這個是很重要的一點。尤其是對于某些細(xì)胞這一點就是他活去死的致命點。像Caco-2細(xì)胞就是如此。另外關(guān)于傳代很重要一點就是一定不能等到細(xì)胞長滿的時候才去消化傳代。要在細(xì)胞長到70%左右的時候就要傳代了,一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長中已經(jīng)有疊層生長的時候就要立即進(jìn)行消化傳代。不能再拖了。關(guān)于換液傳代時候洗瓶的問題。對于用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞,你在洗的時候如果是用無血清1640去洗細(xì)胞在隨即后的幾次中會比用DMEM洗的長的要好。同樣,用1640培養(yǎng)的也有這個現(xiàn)象。如果不嫌麻煩的話,可以用PBS來洗,洗的效果和用無血清培養(yǎng)基洗的效果基本上是一樣的,對于有些細(xì)胞會更勝一籌。洗的目的主要是洗去培養(yǎng)瓶里殘留的血清,防止它對胰酶的影響。這樣能夠保證胰酶的消化能力優(yōu)先,是很關(guān)鍵的一點。先補(bǔ)充這么多,還會后續(xù)更新。再補(bǔ)充一點:傳代時PBS洗是很重要的一步,最近發(fā)現(xiàn),用PBS就可以把細(xì)胞消化開來。加入PBS放置10-15分鐘,有些需要更長的時間,等到細(xì)胞一個個分離開來的時候,就可以直接吹打下來,但是和胰酶消化一樣,要控制好時間,不能時間太過了,要不然損傷細(xì)胞,細(xì)胞不容易成活,狀態(tài)容易不好。這個方法對于某些細(xì)胞是很管用的。有些細(xì)胞用胰酶消化不容易消化成單個的時候,或者臨時沒有胰酶了,可以選用此方法。不過一定要試試,看是否適合你的細(xì)胞。 SBC-5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SACC-LM細(xì)胞、Soleus clone 8細(xì)胞、253J-Bladder-V細(xì)胞 OVCA432細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KU 19-19細(xì)胞、REC-1細(xì)胞、H-838細(xì)胞 NCI.H460細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:THP-1(ATCC)細(xì)胞、P3J HR-1細(xì)胞、NS-I/1細(xì)胞 B16/F10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc_05_04細(xì)胞、CAL 39細(xì)胞、HCC366細(xì)胞 JB6Cl30細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MLO-Y4細(xì)胞、H661細(xì)胞、DHL4細(xì)胞 RPMI-7951細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HDQP1細(xì)胞、SBC-3細(xì)胞、TC-1 [Mouse lung]細(xì)胞 NCI-H292細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FC33細(xì)胞、GM04671細(xì)胞、Eca-109細(xì)胞 HEK-A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTPA細(xì)胞、VAESBJ細(xì)胞、NCIH747細(xì)胞 Super Tube細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCCVII/St細(xì)胞、COR-L23/P細(xì)胞、TE5細(xì)胞 BCP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M4e細(xì)胞、SK-CO-1細(xì)胞、IOSE29細(xì)胞 CaEs17細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:X63Ag8-653細(xì)胞、SU-DHL-4細(xì)胞、B16/BL6細(xì)胞 MC26細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-274-T細(xì)胞、TW 01細(xì)胞、HC-11細(xì)胞 MLE-12細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA361細(xì)胞、Sp 2817細(xì)胞、TMK1細(xì)胞 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