"U266B1細(xì)胞:人外周淋巴細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:懸浮 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:3傳代,2-3天傳一代 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 細(xì)胞生長特性:懸浮生長 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作:①進(jìn)無菌室前要徹底洗手,按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。②操作者動作要輕,安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意,金屬器械不能在火焰中長時間燒灼,以防退火;燒過的器械要冷卻后才能使用;已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼,因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì),吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中;膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長,以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,危害培養(yǎng)細(xì)胞,同時塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶,開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位,避免直立,以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口,培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。④操作時盡量不要談話,咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時,應(yīng)專管專用,一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去,以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面,用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面;防止細(xì)胞交叉污染:所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲備,一旦懷疑發(fā)生交叉污染,可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定,如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變,可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。重要細(xì)胞系的傳代工作應(yīng)由兩人獨(dú)立進(jìn)行;無菌室的徹底消毒①新潔爾滅全面徹底擦洗無菌室。使用前應(yīng)稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比,的優(yōu)點(diǎn)是便宜,而且可以稀釋50倍用,而同樣量的酒精價格可能是新潔爾滅的幾十倍。②甲醛熏蒸法:甲醛是一種廣譜滅菌劑菌,其水溶液和氣體對各種細(xì)菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價廉,熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛。 公司細(xì)胞庫凍存并保種有2300多種各類細(xì)胞系。針對每種不同的細(xì)胞系,公司摸索并積累了大量細(xì)胞培養(yǎng)條件和優(yōu)化參數(shù),為您的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。細(xì)胞培養(yǎng)是生命科學(xué)研究中最基礎(chǔ)、也是最常用的實(shí)驗(yàn)手段。從凍存→復(fù)蘇→傳代→實(shí)驗(yàn),在每一次細(xì)胞培養(yǎng)的過程中我們都是精心呵護(hù),小心培養(yǎng),心里都是默默承諾:我要護(hù)你一世周全!可是可是……無數(shù)次細(xì)胞都因污染而離我而去,投入的不只是我們貌美如花的青春,還有那一去不復(fù)返的經(jīng)費(fèi)!在細(xì)胞生物學(xué),生物化學(xué),免疫學(xué),神經(jīng)生物學(xué),病理學(xué)……只要涉及細(xì)胞的研究領(lǐng)域,都面臨著支原體污染的威脅。在眾多污染物中,也就屬支原體最狡猾了,他最善于隱藏自己,因?yàn)楸恢гw污染的細(xì)胞不會馬上死亡,但會改變細(xì)胞的新陳代謝,甚至?xí)淖兗?xì)胞的基因表達(dá)譜,我們就這樣被欺騙了無數(shù)次,誰讓我們就是個看“顏值”的花癡了。可是我們通過被虐了幾百次的經(jīng)驗(yàn)中總結(jié)出來,當(dāng)你的細(xì)胞出現(xiàn)了這些癥狀時:生長速率改變;活性減弱;形態(tài)改變;染色體畸變;轉(zhuǎn)染效率顯著降低;細(xì)胞復(fù)蘇后存活率降低……。那你就得千萬小心了,也許你的細(xì)胞已經(jīng)被支原體欺凌了! 細(xì)胞消化過程總結(jié):其實(shí)絕大部分細(xì)胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞(絕大部分1min不到)。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對細(xì)胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實(shí)已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細(xì)胞就是完全成單個細(xì)胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,尤其是腫瘤細(xì)胞的一個特性,無論死活的細(xì)胞都是如此,你可以嘗試,準(zhǔn)備100%的單個細(xì)胞懸液,貼壁后觀察細(xì)胞,仍然是幾個幾個細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液(不要笑,這個是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個一個分開)。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來,這個時候即使是成片的(比如Calu-3細(xì)胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個細(xì)胞左右),是正常的,不要試圖再去延長消化時間,或者像有的同學(xué)那樣吹打1h,等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細(xì)胞(潤洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞,一般不超過5min,即可見細(xì)胞成片移動,就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會有難消化的時候,比如tsDC細(xì)胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動。 U118-MG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SV-HUC細(xì)胞、brain-derived Endothelial cells.3細(xì)胞、GH 3細(xì)胞 Tn 5B1-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2029細(xì)胞、OV1/P細(xì)胞、Centre Antoine Lacassagne-78細(xì)胞 no.11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCE-2 [50.B1]細(xì)胞、THC-8307細(xì)胞、HCA-7細(xì)胞 DHL4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IALM細(xì)胞、CALU 1細(xì)胞、GDM1細(xì)胞 PLC PRF 5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RLE-6TN細(xì)胞、U-2932細(xì)胞、DMS-53細(xì)胞 HT 1376細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PG-4(S+L-)細(xì)胞、Panc-327細(xì)胞、NCIH1993細(xì)胞 THPI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-BE(2C)細(xì)胞、NBL-12細(xì)胞、HS940細(xì)胞 GS-9L細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC-028細(xì)胞、Neukoplast細(xì)胞、OAW42細(xì)胞 hFOB 1.19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTR8細(xì)胞、MiaPaCa2細(xì)胞、THP-1(ATCC)細(xì)胞 H-2291細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SuDHL 4細(xì)胞、BCaP-37細(xì)胞、HeLa/DDP細(xì)胞 RBL.2H3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT20細(xì)胞、HCC 70細(xì)胞、GM346細(xì)胞 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