"REC-1細胞:人淋巴瘤細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):淋巴母細胞樣 細胞生長:懸浮 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:3—1:6傳代,2-3天換液1次 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 細胞生長特性:懸浮生長 細胞培養(yǎng)實驗基本操作:①進無菌室前要徹底洗手,按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。②操作者動作要輕,安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意,金屬器械不能在火焰中長時間燒灼,以防退火;燒過的器械要冷卻后才能使用;已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼,因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì),吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中;膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長,以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,危害培養(yǎng)細胞,同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶,開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位,避免直立,以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口,培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。④操作時盡量不要談話,咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時,應(yīng)專管專用,一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去,以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面,用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面;防止細胞交叉污染:所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備,一旦懷疑發(fā)生交叉污染,可做細胞遺傳學(xué)方面的鑒定,如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變,可以復(fù)蘇早期凍存的細胞使用。重要細胞系的傳代工作應(yīng)由兩人獨立進行;無菌室的徹底消毒①新潔爾滅全面徹底擦洗無菌室。使用前應(yīng)稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比,的優(yōu)點是便宜,而且可以稀釋50倍用,而同樣量的酒精價格可能是新潔爾滅的幾十倍。②甲醛熏蒸法:甲醛是一種廣譜滅菌劑菌,其水溶液和氣體對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價廉,熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛。 凍存和復(fù)蘇的原則:慢凍快融》當(dāng)細胞冷到零度以下,可以產(chǎn)生以下變化:細胞器脫水,細胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍,可使細胞逐步脫水,細胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反,結(jié)晶就大,大結(jié)晶會造成細胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結(jié)晶。慢凍程序》1.標準程序:采用細胞凍存器》當(dāng)溫度在-25℃以上時,1~2℃/min;當(dāng)溫度達-25℃以下時,5~10℃/min;當(dāng)溫度達-100℃時,可迅速放入液氮中。2.簡易程序:將冷凍管(管口要朝上)放入紗布袋內(nèi),紗布袋系以線繩,通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,按每分鐘溫度下降1~2℃的速度,在40min內(nèi)降至液氮表面過夜,次晨投人液氮中。3.傳統(tǒng)程序:冷凍管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。細胞凍存方法:1.預(yù)先配制凍存液》(1)8%DMSO+細胞生長液(92%血清)2.取對數(shù)生長期細胞,經(jīng)胰酶消化后,加入適量凍存液,用吸管吹打制成細胞懸液(1×10(6)~5×10(6)細胞/ml)。3.加入1ml細胞于凍存管中,密封后標記冷凍細胞名稱和冷凍日期。液氮長期保存。保存細胞的復(fù)蘇方法:1.快速解凍》凍存細胞從液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,輕輕搖動冷凍管,使其在1分鐘內(nèi)全部融化(不要超過3分鐘)。2.解凍后的細胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng),24小時后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液,以去除DMSO。3.如果細胞對冷凍保護劑特別敏感解凍后的細胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護劑,然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。 細胞的凍存:目前,細胞凍存最常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護劑的緩慢冷凍法凍存細胞。主要操作步驟為:(1)選擇處于對數(shù)生長期的細胞,在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細胞,使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。(2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,細胞濃度為3×10(6)~1×10(7)/mL之間。(3)將上述細胞分裝于安瓿或?qū)S美鋬鏊芰瞎苤校碴逞b1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要完全封閉,圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標記好細胞名稱和凍存日期,同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))。(4)將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜,次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時,再移至冰箱冷凍室內(nèi)3~4小時,再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時,最后沉入液氮中。細胞凍存在液氮中可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只安瓿細胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長情況,然后再繼續(xù)凍存。 L-5178-Y細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Clone 929細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-330細胞、GM03569D細胞 HRA 19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rat Lung Epithelial-6-T-antigen Negative細胞、NCI-H2444細胞、L02細胞 FRH-0201細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP-Clone-FGC細胞、H-125細胞、SCLC-21H細胞 PANC-10-05細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-878細胞、TGBC11TKB細胞、B16 BL6細胞 AR4IP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:D341 Med細胞、IEC 6細胞、SUDHL-16細胞 A-375.S2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LN-229細胞、H35細胞、HCT 15細胞 FC33細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MonoMac1細胞、HEK-A細胞、AM38細胞 OVCAR 433細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO394細胞、SMMC7721細胞、RPMI 8226細胞 Mouse Colon 38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KTC1細胞、SNU-484細胞、MDA-231細胞 Leukemia L1210細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Normal Rat, August 3, 1983細胞、NCI.H226細胞、HCGC細胞 Capan2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-460細胞、KMB 17細胞、DI TNC1細胞 MuM-2B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MNNG細胞、KYSE 70細胞、CL34細胞 RGCs細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-MES-1細胞、C81-61細胞、3T6 Swiss Albino細胞 RPE D407細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM115F細胞、MGHU3細胞、SW-480細胞 GFP-Olig2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hTERT-RPE細胞、AML 12細胞、NCIH1618細胞 SK-MEL-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBZY-1細胞、GM07404D細胞、Strain L-929細胞 SK-MEL-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBZY-1細胞、GM07404D細胞、Strain L-929細胞 Hs294T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDAPCa-2b細胞、DanG細胞、J-82細胞 PZ-HPV-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-216細胞、174xCEM.T2細胞、HEK-293FT細胞 SGC-7901細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH596細胞、NK-92細胞、V-79-4細胞 KYSE-150細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BJA-B細胞、74Int細胞、Ly1細胞 Leukemia 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604.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2073細胞、L(TK-)細胞、U266-B1細胞 SKM-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HGMC細胞、GM00637H細胞、L cells細胞 OVCAR 5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Nb-2細胞、MTC-TT細胞、SW527細胞 SUP T1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT-325細胞、MT-2細胞、SKNF1細胞 SPCA1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep-G2細胞、DHL-5細胞、CCD 966 SK細胞 SU-DH-L5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC 61細胞、RetroPack PT67細胞、EBTr細胞 Nb2a細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM clone 7細胞、PIGI細胞、Kato-III細胞 SCC7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Douglas Foster-1細胞、ASH3細胞、Balb/3T3-4-Cl31細胞 SHG44細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK293S細胞、SGC-7901/DDP細胞、T24(ECV304)細胞 CZ-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ST細胞、EFO-27細胞、HMC細胞 T-ALL1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RS(4;11)細胞、HFE-145細胞、SKMel-5細胞 143BTK-細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H9細胞、NCIH1770細胞、HCEC細胞 KP 4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Saos2細胞、D341Med細胞、CCD 19Lu細胞 H3255_DA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCS2/8細胞、KPL-4細胞、OCI Ly3細胞 HCT-8/V細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DR2R 1610細胞、STTG1細胞、HuTu-80細胞 U-118 MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DH82細胞、BT 20細胞、HEK/EBNA細胞 FRH-0201細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP-Clone-FGC細胞、HuH-1細胞、Okayama University Medical School-23細胞 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