抗體的制備過(guò)程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
(石蠟切片需做抗原修復(fù))
英文名稱(chēng) Anti-B7H4
中文名稱(chēng) B7-H4抗體
別 名 B7-H4; B7h4; B7S1; B7x; BC032925; Immune costimulatory protein B7H4; MGC41287; PRO1291; T cell costimulatory molecule B7x; V set domain-containing T cell activation inhibitor 1; VCTN1; VTCN1_HUMAN.
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗體來(lái)源 Rabbit
克隆類(lèi)型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Dog
產(chǎn)品類(lèi)型 一抗
研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
蛋白分子量 predicted molecular weight: 28kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human B7H4 N-terminus
亞 型 IgG
純化方法 affinity purified by Protein A
儲(chǔ) 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無(wú)載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過(guò)濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點(diǎn)
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對(duì)抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見(jiàn)。
抗體制備過(guò)程:
1.材料與試劑
a.提取的動(dòng)物 Ig
b.弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實(shí)驗(yàn)活體。
3、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。
4、試取血樣進(jìn)行測(cè)試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實(shí)驗(yàn)活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無(wú)菌采制)
下列是B7-H4抗體 的相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品:
糖化酵母現(xiàn)貨,ATCC菌株
卡爾斯伯酵母培養(yǎng),ATCC菌株
滅酵母保存,ATCC菌株
深紅酵母售價(jià),ATCC菌株
粘紅酵母現(xiàn)貨,ATCC菌株
粉狀畢赤酵母培養(yǎng),ATCC菌株
土星漢遜酵母保存,ATCC菌株
杰丁漢遜酵母售價(jià),ATCC菌株
分解代謝物阻遏4樣蛋白(CCRN4L)ELISA Kit for Carbon Catabolite Repression 4 Like Protein (CCRN4L)規(guī)格:48T/96T
白介素5受體α(IL5Rα)ELISA Kit for Interleukin 5 Receptor Alpha (IL5Ra)規(guī)格:48T/96T
黏病毒耐藥蛋白2(MX2)ELISA Kit for Myxovirus Resistance 2 (MX2)規(guī)格:48T/96T
轉(zhuǎn)錄銜接因子1(TADA1)ELISA Kit for Transcriptional Adaptor 1 (TADA1)規(guī)格:48T/96T
銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(COPT2)ELISA Kit for Copper Transporter 2 (COPT2)規(guī)格:48T/96T
細(xì)胞色素b(COB)ELISA Kit for Cytochrome b (COB)規(guī)格:48T/96T
核有絲分裂器蛋白1(NUMA1)ELISA Kit for Nuclear Mitotic Apparatus Protein 1 (NUMA1)規(guī)格:48T/96T
Ashwin蛋白(Ash)ELISA Kit for Ashwin (Ash)規(guī)格:48T/96T
Taperin蛋白(TPRN)ELISA Kit for Taperin (TPRN)規(guī)格:48T/96T
Ropporin 1蛋白(ROPN1)ELISA Kit for Ropporin 1 (ROPN1)規(guī)格:48T/96T
N-α-酰轉(zhuǎn)移酶30(NαA30)ELISA Kit for N-Alpha-Acetyltransferase 30 (NaA30)規(guī)格:48T/96T
核仁蛋白9(NOL9)ELISA Kit for Nucleolar Protein 9 (NOL9)規(guī)格:48T/96T
磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體Kuwanon E中文名:別名:分子式:C25H28O6
肌動(dòng)蛋白樣蛋白6A抗體11-Hydroxytephrosin中文名:11-羥基灰葉素別名:分子式:C23H22O8
磷酸化紅細(xì)胞陰離子交換蛋白1抗體5,7,4'-Trihydroxy-3,6-dimethoxy-3'-prenylflavone中文名:別名:分子式:C22H22O7
障礙自整合蛋白BAF抗體Bidwillol A中文名:別名:分子式:C21H22O4
磷酸化Bax抗體Atalantoflavone中文名:別名:分子式:C20H16O5
B7-H4抗體 Azotobacter vinelandii種屬:Azotobacter vinelandii
提供形式:凍干粉
安全等級(jí):1
模式菌株:no
培養(yǎng)方法
培養(yǎng)基:胰胨大豆瓊脂(TSA):胰蛋白胨(酪蛋白胰酶消化物) 15.0g,大豆蛋白胨(大豆粉木瓜蛋白酶消化物) 5.0g,氯化鈉 5.0g,瓊脂 15.0g,pH7.3±0.2。121℃,15min。
生長(zhǎng)條件:30℃,好氧棕色固氮菌