"NCI-H1666細胞：人肺支氣管癌細胞系
細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：４傳代；每周換液２次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁生長，松散
傳代培養(yǎng)及其操作步驟：原代細胞培養(yǎng)成功以后，需要進行分離培養(yǎng)，否則細胞會因生存空間不足或密度過大，營養(yǎng)障礙，影響細胞生長。細胞由原培養(yǎng)瓶內分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細胞允許培養(yǎng)的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。傳代細胞形成細胞株的利處在于提供了大量持久的實驗材料，便于實驗?！静僮鞑襟E】１)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內舊培養(yǎng)液；２)向瓶內加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜；３)置３７℃孵箱或室溫(２５℃溫度)下進行消化，２~５min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現(xiàn)胞質回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶內加入Hanks液少量，輕輕轉動培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化；５)使用彎頭吸管，吸取瓶內培養(yǎng)液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔，以防用力過猛損傷細胞；６)用計數(shù)板計數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO２培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；７)細胞培養(yǎng)換液時間應根據(jù)細胞生長的狀態(tài)和實驗要求來確定。一般２～３d后應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴大培養(yǎng)或換成維持液?！咀⒁馐马棥浚?掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷；２)掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。
細胞培養(yǎng)時分布不均勻，通常操作步驟：做細胞生物學實驗，細胞鋪板大概是我們最常見的一個實驗。但有時候鋪得不是很均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂。下面為大家分享幾點經(jīng)驗。盡量消化細胞分散成單細胞懸液。對于易于消化的細胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶潤洗一遍（25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板），棄掉胰酶，37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右，鏡下觀察是否細胞消化較為分散。如果不夠，延長消化時間。96孔板一般以100微升每孔接種，直接用100微升移液器吸取細胞懸液，沿孔壁（稍離開一點孔底即可，不要離底太高）直接接入，移液器不需完全打到，輕輕按下即可，每鋪完一行換一次槍頭同時輕輕混勻細胞懸液。都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（我一般輕巧敲三下），太強或次數(shù)太多會導致細胞集中成堆，將板順時針旋轉（逆時針效果不好），依次敲擊剩余三個邊，靜置約5分鐘，放入37度培養(yǎng)箱。6孔板、12孔板或24孔板，可采用將每個孔加入少量無血清培養(yǎng)基，晃動浸潤整個孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底，其它孔依此類推，這樣整個孔底都是濕潤的，細胞懸液會平鋪在整個孔底，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這個方法就是有點慢，但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式，但力度沒有96孔板好掌握，效果沒有96孔板好。培養(yǎng)瓶里面加好細胞以后(比如傳代好/分好細胞以后)，先順時針搖晃3次，馬上逆時針搖晃3次。然后延X軸Y軸分別水平搖動3次。放入CO2培養(yǎng)箱后,平放著培養(yǎng)瓶重復延X軸Y軸分別水平搖動3次。
我?？吹揭粋€比較復雜的四步消化法，這個挺有意思，我也是次聽說，應該是網(wǎng)友自己發(fā)展出來的方法，很有參考價值。但我估計這個方法可能對付少數(shù)非常怪異的細胞才需要這么復雜的程序。我目前養(yǎng)過的近３００株細胞里面，還沒遇到這么怪異的。比如Caco２其實是很好消化的細胞，不需要胰酶孵育即可，只是有點成片分布。不要以為成片分布是自己沒養(yǎng)好，這個視細胞而定。如果和標準形態(tài)不一致，那可能是自己沒消化好導致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至完全吹打成單細胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細胞的特性，是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細胞之后會對你越來越不好；比較難消化的細胞(潤洗方法５min還不能消化)，就以colon cancer為例，比如HCT１５, LS４１１和KM１２，這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般１００ mm dish，一次最多加入５００ul，就足夠了，一般我加３００ul。即使這樣難消化的細胞，一般不超過５min，即可見細胞成片移動，就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞，但也只要用少量胰酶孵育，３min左右即可看到成片沙狀移動。
IGROV 1細胞系相關產(chǎn)品：HDF-a細胞、NCI-Hut 125細胞、OLN-93細胞
Hs578Bst細胞系相關產(chǎn)品：RCC10 RGB細胞、A427細胞、EFM192C細胞
SKUT-1細胞系相關產(chǎn)品：H-498細胞、Kit225細胞、Ra #1細胞
3D4/21細胞系相關產(chǎn)品：32D CL3細胞、MNNG/HOS Cl #5細胞、TFH細胞
Mink Lung細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H1915細胞、HCC-44細胞、LNCaP clone FGC細胞
LTEPa2細胞系相關產(chǎn)品：SNU-484細胞、PTK-1細胞、MADB106細胞
MeWo細胞系相關產(chǎn)品：OCI-Ly3細胞、HBVSMC細胞、OPM-2細胞
CAL148細胞系相關產(chǎn)品：Hs895T細胞、QG-56細胞、SKOV-433細胞
CAL12T細胞系相關產(chǎn)品：L6細胞、SEG1細胞、NCI H747細胞
OCI-Ly 10細胞系相關產(chǎn)品：IEC 18細胞、HLE B-3細胞、WILL-2細胞
UWB1-289細胞系相關產(chǎn)品：A2780/CP細胞、HHFK細胞、DBTRG-05MG細胞
SNU-398細胞系相關產(chǎn)品：NOZ細胞、LICR-HN-6細胞、NF639細胞
INS1-E細胞系相關產(chǎn)品：PLA801-95D細胞、WEHI 3B細胞、COLO 699細胞
BERH-2細胞系相關產(chǎn)品：MM1-S細胞、HL-7702細胞、Roswell Park Memorial Institute 2650細胞
Lewis Lung Cancer細胞系相關產(chǎn)品：Embryonic Bovine Tracheal cells細胞、HEL-1細胞、Caki-1細胞
NCI-H1993細胞系相關產(chǎn)品：PTK 1細胞、HuH-6細胞、P3/NS1/Ag4-1細胞
NCI-H1993細胞系相關產(chǎn)品：PTK 1細胞、HuH-6細胞、P3/NS1/Ag4-1細胞
Reuber H-35細胞系相關產(chǎn)品：STO細胞、Hs940-T細胞、PL 5細胞
Huh7.5細胞系相關產(chǎn)品：Hs819.T細胞、L-WRN細胞、Mono Mac6細胞
Panc 2.03細胞系相關產(chǎn)品：CC-LP-1細胞、SNU-368細胞、SKML-28細胞
SNU251細胞系相關產(chǎn)品：LS 513細胞、L-Wnt-3A細胞、AN3-CA細胞
NPA細胞系相關產(chǎn)品：Rabbit Kidney 13細胞、JB-6細胞、GM16136細胞
HCC-44細胞系相關產(chǎn)品：NU-GC-2細胞、BLO11細胞、TH1細胞
Bovine Turbinate細胞系相關產(chǎn)品：MARC-145細胞、TCC-PAN2細胞、RPMI-1846細胞
MGC803細胞系相關產(chǎn)品：A2780-CP細胞、SK-GT-4細胞、CEM細胞
KE37細胞系相關產(chǎn)品：H2107細胞、J111細胞、M14細胞
HT1197細胞系相關產(chǎn)品：190PT細胞、MKN1細胞、A-375細胞
MDA-MB-468-RED細胞系相關產(chǎn)品：GM346細胞、Medical Research Council cell strain-5細胞、Me Wo細胞
RCM1細胞系相關產(chǎn)品：J-82細胞、RMS 1598細胞、Laboratory of Allergic Diseases 2細胞
SF539細胞系相關產(chǎn)品：K562細胞、SJ-Rh 30細胞、3T3NIH細胞
C-8161細胞系相關產(chǎn)品：PLB-985細胞、BS-C-1細胞、SNU-423細胞
SK-N-BE(1)n細胞系相關產(chǎn)品：NSC34細胞、H-2023細胞、EAHY-926細胞
ROS-17/2.8細胞系相關產(chǎn)品：MDA2B細胞、COLO 824細胞、GM03570E細胞
CHO cell clone K1細胞系相關產(chǎn)品：HCC-95細胞、SKNSH細胞、HCC9724細胞
C8D1A細胞系相關產(chǎn)品：NCIH1930細胞、HELA-GFP細胞、Dunn LM8細胞
Nittby-Salford 1細胞系相關產(chǎn)品：FAK+/+細胞、H-1522細胞、Dx5細胞
NCI-H1651細胞系相關產(chǎn)品：Caco-2/ATCC細胞、NCI/ADRRES細胞、ARO 81-1細胞
Mouse podocyte細胞系相關產(chǎn)品：PANC 813細胞、MEC-1細胞、L5178Y-R細胞
H-2141細胞系相關產(chǎn)品：67NR細胞、TK10細胞、bEND.3細胞
BAC1.2F5細胞系相關產(chǎn)品：LAD-2細胞、HBVP細胞、VB細胞
LM TK negative細胞系相關產(chǎn)品：SW1088細胞、P3J細胞、HR1K細胞
COLO320-DM細胞系相關產(chǎn)品：HuO9細胞、RBMEC細胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3細胞
KP-N-RT細胞系相關產(chǎn)品：NCIH1563細胞、Ca-Ski細胞、HG2855細胞
Los Angeles Prostate Cancer-4細胞系相關產(chǎn)品：SF295細胞、HKBML細胞、HRVEC細胞
SUNE1細胞系相關產(chǎn)品：GM06141B細胞、NCIH1930細胞、NCIH446細胞
MC 3T3-E1細胞系相關產(chǎn)品：SUNE1細胞、WBF344細胞、OE19細胞
Toledo細胞系相關產(chǎn)品：G-361細胞、H-295細胞、KP4細胞
Emory University-2細胞系相關產(chǎn)品：ME 180細胞、MDA-MB-157細胞、HIT clone T15細胞
A72細胞系相關產(chǎn)品：JROECL19細胞、P3/NS1/1-Ag4.1細胞、PF382細胞
293F細胞系相關產(chǎn)品：NCIH1876細胞、T_T_細胞、MV4;11細胞
KM12-SM細胞系相關產(chǎn)品：143B TK-細胞、Potorous tridactylus Kidney 2細胞、HLFa細胞
L-6 myoblast細胞系相關產(chǎn)品：P30-OHKUBO細胞、SKCO-1細胞、TALL-104細胞
B16 F10細胞系相關產(chǎn)品：A-704細胞、253JBV細胞、LNCaP subline C4-2細胞
MES-SA-Dx5細胞系相關產(chǎn)品：CAL-39細胞、3T3細胞、38C13細胞
UCLA SO M14細胞系相關產(chǎn)品：H-220細胞、CEF細胞、C2BBe 1細胞
TE1細胞系相關產(chǎn)品：H-2228細胞、COLO-320HSR細胞、Med 341細胞
Hopkins-92細胞系相關產(chǎn)品：SKBr3細胞、H1650細胞、Panc 4.03細胞
MFE296細胞系相關產(chǎn)品：SU-DHL1細胞、CCD-841CoTr細胞、HBL1細胞
B16-F1細胞系相關產(chǎn)品：Huh7.5.1細胞、PAN 02細胞、143B TK-細胞
SK-N-MC細胞系相關產(chǎn)品：Panc-02細胞、TE354T細胞、MDA-MB231細胞
293S細胞系相關產(chǎn)品：CL-34細胞、LC1sq細胞、RBL-2H3細胞
BL6細胞系相關產(chǎn)品：UO-31細胞、MC-38細胞、NIH:OVCAR-8細胞
MPVECs細胞系相關產(chǎn)品：WM 239A細胞、PL-9細胞、Hs819.T細胞
AsPC-1細胞系相關產(chǎn)品：MCF12A細胞、HCT-8/V細胞、LSECs細胞
Panc_02_03細胞系相關產(chǎn)品：OCI-LY-19細胞、HCC1954-BL細胞、KU1919細胞
LAD2細胞系相關產(chǎn)品：IPEC-1細胞、RGB細胞、WERIRb1細胞
MEG01細胞系相關產(chǎn)品：OVCAR4細胞、Hs706T細胞、Murine Long bone Osteocyte-Y4細胞
NCI-H716細胞系相關產(chǎn)品：GM 637細胞、NT2-D1細胞、PK13細胞
H19-7細胞系相關產(chǎn)品：GM07404細胞、OCI AML2細胞、SCL-II細胞
B16-F10--RED細胞系相關產(chǎn)品：3T3(A31)細胞、RCM-1 [Human rectum adenocarcinoma]細胞、HO-8910PM細胞
H-2591細胞系相關產(chǎn)品：HTori-3細胞、Ej138細胞、HCC1588細胞
C33A細胞系相關產(chǎn)品：NCIH1770細胞、TW-039細胞、HS0578T細胞
SKUT-1細胞系相關產(chǎn)品：H-498細胞、E0771細胞、NCI-SNU-761細胞
Jurkat E6細胞系相關產(chǎn)品：Hs 343.T細胞、HEK-EBNA細胞、VP 267細胞
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