"SK-N-BE(2)-C 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系
細(xì)胞背景資料：神經(jīng)母細(xì)胞瘤；骨髓轉(zhuǎn)移；男性 
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣 
細(xì)胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法：傳代培養(yǎng)：是指細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶以１：２或１：２以上的比例轉(zhuǎn)移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細(xì)胞，可根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法進(jìn)行細(xì)胞傳代。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代，部分貼壁的細(xì)胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細(xì)胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進(jìn)行傳代，或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進(jìn)行傳代。實(shí)驗(yàn)步驟：①入無菌室之前用肥皂洗手，再用７５% 的酒精擦拭消毒雙手；②倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液３７℃下預(yù)熱；③超凈臺臺面應(yīng)整潔，用７５%酒精棉球擦拭清潔；④打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面２０min左右，關(guān)閉紫外燈，打開風(fēng)機(jī)清潔空氣除去臭氧；⑤點(diǎn)燃酒精燈;取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi)；⑥將培養(yǎng)用液瓶口用７５%酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上；⑦倒掉培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用２-３ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每個大培養(yǎng)瓶加入１ml胰酶，小培養(yǎng)瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當(dāng)細(xì)胞收回突起變圓時立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細(xì)胞提早脫落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復(fù)吹打消化好的細(xì)胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(７-１０ml/大瓶;３-５ml/小瓶)制成細(xì)胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋好瓶蓋，適度擰緊后稍回轉(zhuǎn)，以利于CO２的進(jìn)入，將培養(yǎng)瓶放回CO２培養(yǎng)箱；⑩對懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，步驟７-９不做。直接將細(xì)胞懸液進(jìn)行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。 
細(xì)胞生長：貼壁 
細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源 
SK-N-BE(2)-C 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系
細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支) 
凍存和復(fù)蘇的原則：慢凍快融》當(dāng)細(xì)胞冷到零度以下，可以產(chǎn)生以下變化：細(xì)胞器脫水，細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高，并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍，可使細(xì)胞逐步脫水，細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶；相反，結(jié)晶就大，大結(jié)晶會造成細(xì)胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結(jié)晶。慢凍程序》1.標(biāo)準(zhǔn)程序：采用細(xì)胞凍存器》當(dāng)溫度在-25℃以上時，1~2℃/min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時，5~10℃/min；當(dāng)溫度達(dá)-100℃時，可迅速放入液氮中。2.簡易程序：將冷凍管（管口要朝上）放入紗布袋內(nèi)，紗布袋系以線繩，通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口，按每分鐘溫度下降1~2℃的速度，在40min內(nèi)降至液氮表面過夜，次晨投人液氮中。3.傳統(tǒng)程序：冷凍管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16~18小時（或隔夜）→液氮槽長期儲存。細(xì)胞凍存方法：1.預(yù)先配制凍存液》（1）8%DMSO+細(xì)胞生長液（92%血清）2.取對數(shù)生長期細(xì)胞，經(jīng)胰酶消化后，加入適量凍存液，用吸管吹打制成細(xì)胞懸液（1×10(6)~5×10(6)細(xì)胞/ml）。3.加入1ml細(xì)胞于凍存管中，密封后標(biāo)記冷凍細(xì)胞名稱和冷凍日期。液氮長期保存。保存細(xì)胞的復(fù)蘇方法：1.快速解凍》凍存細(xì)胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1分鐘內(nèi)全部融化（不要超過3分鐘）。2.解凍后的細(xì)胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)，24小時后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。3.如果細(xì)胞對冷凍保護(hù)劑特別敏感解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護(hù)劑，然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。 
細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。 
細(xì)胞來源說明：細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 
細(xì)胞生長特性：貼壁 
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細(xì)胞傳代時消化的問題：可以這樣說，對于需要消化傳代的細(xì)胞，每一次的消化都是對這個細(xì)胞存活與否，狀態(tài)好與不好最至關(guān)重要的考驗(yàn)。很多同學(xué)都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細(xì)胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細(xì)胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細(xì)胞消化同樣的時間對細(xì)胞是不公平的，他們受到了差別待遇當(dāng)然會有脾氣啊。我后來對消化的方法進(jìn)行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。（以難消化細(xì)胞為例）；具體操作：１)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗１-２遍，（這是前奏，即為步，目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類盡量洗掉。２)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細(xì)胞對比觀察看誰長的更好一點(diǎn)就知道該細(xì)胞對胰酶的敏感度了。）３)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入０.３ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打２-３遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用２ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。（你也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比。）這是第三步。４)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進(jìn)去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，呵呵。繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細(xì)胞間隙明顯，細(xì)胞獨(dú)立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實(shí)際情況你自己把握）。這是第四步。其實(shí)還可以有第五步，對于特別難消化的細(xì)胞和對胰酶特別敏感的細(xì)胞的話，你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細(xì)胞更好的狀態(tài)，更漂亮的樣子，沒辦法，你必須分多批多次消化，這樣才能限度地將胰酶對細(xì)胞的損傷降到最低，保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠。當(dāng)然了，如果細(xì)胞是屬于那種很容易消化的細(xì)胞，像RAW２６４.７，僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實(shí)驗(yàn)中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細(xì)胞時把各步消化的細(xì)胞分別培養(yǎng)起來做比較，去摸索好細(xì)胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開展。將細(xì)胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對細(xì)胞的損傷之外，還有一個更重要的作用就是，可以程度地把細(xì)胞吹打成單個單個的狀態(tài)，不成片不連體。 
細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書 
H510A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：DHL-5細(xì)胞、PLB 985細(xì)胞、COLO-741細(xì)胞 
P3-X63-Ag 8.653細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1618細(xì)胞、NBLS細(xì)胞、TGW細(xì)胞 
CALU1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LUDLU1細(xì)胞、NCI-HUT-69細(xì)胞、H1770細(xì)胞 
SVEC4-10細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hx147細(xì)胞、CORL88細(xì)胞、Hs 729.T細(xì)胞 
H660細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE5細(xì)胞、MC3T3-E1(C4)細(xì)胞、UPCI-SCC-90細(xì)胞 
Sun Yat-sen university Ophtalmic center-Retinoblastoma 50細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs822T細(xì)胞、SNU-449細(xì)胞、U266 B1細(xì)胞 
IR 983F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-MB-231 #4175細(xì)胞、Detroit-562細(xì)胞、HCT GEO細(xì)胞 
NCI-H102細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KHYG1細(xì)胞、B/C3T3細(xì)胞、WIL2 S細(xì)胞 
PL9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Centre Antoine Lacassagne-78細(xì)胞、CAKI1細(xì)胞、MDA-MB-231-GFP細(xì)胞 
NCI-H1092細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RPMI 2650細(xì)胞、COR-L105細(xì)胞、KOSC-2細(xì)胞 
D 407細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCT 15細(xì)胞、293 HEK細(xì)胞、ECC12細(xì)胞 
H460細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Karpas 299細(xì)胞、87MG細(xì)胞、MA 104細(xì)胞 
BT 325細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：BCaP-37細(xì)胞、KNS-62細(xì)胞、DU-4475細(xì)胞 
NCI-H87細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：7404細(xì)胞、RH-35細(xì)胞、COLO824細(xì)胞 
OCI-Ly 19細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-HEP-1細(xì)胞、UCLA RO-81-A-1細(xì)胞、J 82細(xì)胞 
P30/0HK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UMUC3細(xì)胞、H2107細(xì)胞、293 Ad5細(xì)胞 
P30/0HK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：UMUC3細(xì)胞、H2107細(xì)胞、293 Ad5細(xì)胞 
Walker 256細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Centre Antoine Lacassagne-85-1細(xì)胞、GBC-SD細(xì)胞、BHP 10-3細(xì)胞 
H1838細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：DCS細(xì)胞、P3.NS-1/1.Ag4.1細(xì)胞、MDAMB157細(xì)胞 
NCIH250細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH322細(xì)胞、8305-C細(xì)胞、SNU-761細(xì)胞 
SK-N-BE(2)-C 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系
HEL 299細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H2085細(xì)胞、MM.1S細(xì)胞、L-5178-Y細(xì)胞 
Hs 888.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SPDC-CCL141細(xì)胞、LC-MS細(xì)胞、TCC-PAN2細(xì)胞 
H-716細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CHL-IU細(xì)胞、KYSE140細(xì)胞、MGH-U3細(xì)胞 
H358細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3/NS1/1-Ag4.1細(xì)胞、NK-92 transfected with MFG-hIL2細(xì)胞、ACC-2細(xì)胞 
H125細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MOLM16細(xì)胞、LLC-WRC 256細(xì)胞、RPPVEC細(xì)胞 
C666-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：AM細(xì)胞、WI-38細(xì)胞、AU-Mel細(xì)胞 
MDA-PCa-2b細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-2110細(xì)胞、HT144mel細(xì)胞、MLMEC細(xì)胞 
Normal Rat Kidney-52E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：U-138-MG細(xì)胞、MDA-MB157細(xì)胞、Wayne State University-Head and Neck 13細(xì)胞 
MV 4;11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE 140細(xì)胞、CV-1.K細(xì)胞、RAW2647細(xì)胞 
Shadyside Hospital Pittsburgh-77細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H9c2 (2-1)細(xì)胞、R1800[RA]細(xì)胞、M059K細(xì)胞 
CAL-39細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：B16 subline B78細(xì)胞、EA.hy 926細(xì)胞、MC-3T3-E1細(xì)胞 
RAW 264.7細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H2172細(xì)胞、MFM-223細(xì)胞、SK-GT-4細(xì)胞 
H-1930細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PaCa2細(xì)胞、HS-294-T細(xì)胞、253J-BV細(xì)胞 
Mel RM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MFC細(xì)胞、HEK-293-F細(xì)胞、H2135細(xì)胞 
VMRCLCD細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：L-5178-Y-R細(xì)胞、PaTu-8988s細(xì)胞、Astrocyte type I clone細(xì)胞 
Huh 7.5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MiaPaCa2細(xì)胞、Lewis Lung Cancer細(xì)胞、SUM 190細(xì)胞 
MB49細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HOC細(xì)胞、SF-763細(xì)胞、Mhh-Call 2細(xì)胞 
OCI-Ly07細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-175細(xì)胞、Nthy-ori 3-1細(xì)胞、U118MG細(xì)胞 
HLE-B3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：2PK-3細(xì)胞、HTSMC細(xì)胞、RPE-hTERT細(xì)胞 
SW 756細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：G422細(xì)胞、RBL-1細(xì)胞、CCD 966SK細(xì)胞 
QG56細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EVSA/T細(xì)胞、U-343MG細(xì)胞、Neuro2a細(xì)胞 
GDM-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MCF7-GFP細(xì)胞、B16 melanoma F10細(xì)胞、UWB1289細(xì)胞 
ARO81細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SN12C細(xì)胞、Y3-Ag1,2,3細(xì)胞、Baby Hamster Kidney from litter No. 21細(xì)胞 
IOSE29細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C32r細(xì)胞、SCC7細(xì)胞、CORL26細(xì)胞 
16HBE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MC38細(xì)胞、RASMC細(xì)胞、SNB.19細(xì)胞 
U-CH1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：CAL33細(xì)胞、Rin-M-5F細(xì)胞、CT26WT細(xì)胞 
A549/DDP細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H2029細(xì)胞、SW 948細(xì)胞、COLO320 DM細(xì)胞 
H-1435細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：YD15細(xì)胞、H-2135細(xì)胞、OCI/AML2細(xì)胞 
KLM1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：EU-4細(xì)胞、ESC-410細(xì)胞、NCIH2110細(xì)胞 
UM-UC14細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH510細(xì)胞、OVCAR 8細(xì)胞、Psi2-DAP細(xì)胞 
CCRF-CEM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU-601細(xì)胞、ZR-75-1細(xì)胞、OCLY8細(xì)胞 
NCI-322細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-2171細(xì)胞、H226細(xì)胞、NCI-H460細(xì)胞 
B16 melanoma細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：As-PC1細(xì)胞、End1/E6E7細(xì)胞、H889細(xì)胞 
HFTF細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HeLa細(xì)胞、AX-Mel細(xì)胞、NCIH1048細(xì)胞 
Sp2/mIL-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDAPCa2b細(xì)胞、WM239A細(xì)胞、UCLA RO-81-A-1細(xì)胞 
TFH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RAW 264.7細(xì)胞、NU-GC-2細(xì)胞、OCILY-10細(xì)胞 
TFH細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RAW 264.7細(xì)胞、NU-GC-2細(xì)胞、OCILY-10細(xì)胞 
HEK293EBNA細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：OACP4 C細(xì)胞、NCIH2110細(xì)胞、3AA細(xì)胞 
HARA-B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HUCCT1細(xì)胞、MARC145細(xì)胞、DR2R1610細(xì)胞 
HGE細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs343T細(xì)胞、ECGI10細(xì)胞、A-2058細(xì)胞 
IGROV 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HDF-a細(xì)胞、NCI-Hut 125細(xì)胞、OLN-93細(xì)胞 
SK-N-BE(2)-C 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系
REC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MKN-7細(xì)胞、HEMCSS細(xì)胞、CEM clone 7細(xì)胞 
IALM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：DMS273細(xì)胞、COS7細(xì)胞、C28/I2細(xì)胞 
H-889細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1930細(xì)胞、NS-I/1細(xì)胞、SCL-1細(xì)胞 
H647ell細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：SMMC-7721細(xì)胞、C3H10T1/2細(xì)胞、OCIAML4細(xì)胞 
M14-MEL細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-MB 361細(xì)胞、SW982細(xì)胞、CCD-966SK細(xì)胞 
Human Fetal Thymocyte-8810細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC-1569細(xì)胞、H-69細(xì)胞、KATO III細(xì)胞 
HB 611細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RPMI #1846細(xì)胞、CAL12T細(xì)胞、H2405細(xì)胞 
ETCC007細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：VP303細(xì)胞、Panc 08.13細(xì)胞、RCS細(xì)胞 
KTC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：RPMI 8226細(xì)胞、UMC11細(xì)胞、A 375細(xì)胞 
Vero-76細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Jurkat Clone E6-1細(xì)胞、HCC-78細(xì)胞、SKO007細(xì)胞 
MH-S細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1細(xì)胞、NCI-H2452細(xì)胞、COLO 320DM細(xì)胞 
CALU1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：LUDLU1細(xì)胞、LS-513細(xì)胞、COLO320/DM細(xì)胞 
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