"JM-1 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞瘤細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):淋巴母細胞樣 細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當會事。 UCH-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC10RGB細胞、LA-N-5細胞、H1944細胞 U118-MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SV-HUC細胞、brain-derived Endothelial cells.3細胞、GH 3細胞 SK UT 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU216細胞、HD11細胞、MN60細胞 細胞生長:懸浮 JM-1 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞瘤細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%,必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常會誤認為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會使此沈淀物增多,更會誤認為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測,又沒有污染。一般而言,此小黑點應(yīng)不會影響細胞之生長,但若懷疑此血清之品質(zhì),應(yīng)立即停用,更換另一批號的血清。 細胞傳代方法:換液2-3次一周 Wistar Institute, Susan Hayflick細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK293-EBNA1細胞、RPMI-1846細胞、JROECL 21細胞 H-1651細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A431/P細胞、SC1細胞、LTEP-sm細胞 A2058細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-480細胞、AMC-HN8細胞、A7r5細胞 Institute for Medical Research-90細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CACO2細胞、NCIH2009細胞、NCI-H322T細胞 SKMEL-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:M-20細胞、GC-2spd(ts)細胞、BAC1.2F5細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 JM-1 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞瘤細胞系 細胞生長特性:懸浮生長 細胞形態(tài)特性:淋巴母細胞樣 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 University of Arizona Cell Culture-893細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM2132細胞、SKBr3細胞、Sp2/O細胞 H-2195細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-226細胞、Hs683細胞、D324 Med細胞 FRO 81-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hTERT-RPE1細胞、Ect1/E6E7細胞、IMCD3細胞 HET-1A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM3190細胞、Caco2-BBE細胞、LX-2細胞 SNU668細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Malme-3M細胞、H-446細胞、DU 4475細胞 DMS-114細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDAMB-231細胞、253J細胞、293AD細胞 KYSE 510細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1105細胞、RK 13細胞、Hs737T細胞 UMNSAH/DF#1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM 149細胞、HELF細胞、IEC-18細胞 SK.MEL.2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Strain KB細胞、NIH-3T3-L1細胞、95-D細胞 NCIH1568細胞系相關(guān)產(chǎn)品:THEECs細胞、118 MG細胞、RPMC細胞 JM-1 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞瘤細胞系 CAKI.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-ChA1細胞、NKM1細胞、HGMC細胞 H4IIE細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1975細胞、M109細胞、C4I細胞 HEK 293-F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TR 146細胞、Chang liver細胞、RPMI No. 1846細胞 YD38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AG06814-J細胞、OVCAR-8/ADR細胞、143B細胞 IPLB-Sf21-AE細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU1細胞、H-1648細胞、MT-2J細胞 EFM-192C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-33A細胞、MDAPC2B細胞、293-H細胞 EFM-192C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-33A細胞、MDAPC2B細胞、293-H細胞 Wistar Institute, Susan Hayflick細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK293-EBNA1細胞、RPMI-1846細胞、JROECL 21細胞 IM9細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Chang Cells細胞、W256細胞、FTC133細胞 Chinese Hamster Ovary細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs934T細胞、SKBR-3細胞、MGC-803細胞 COLO206F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TC7細胞、INS1細胞、MonoMac6細胞 Mo7e細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2196細胞、CAKI 2細胞、NCI-H510細胞 MDA-MB436細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LA-795細胞、X63Ag8.653細胞、Colon 38細胞 MADISON LUNG TA-109細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PK136細胞、MIA PaCa-2細胞、C666-1細胞 SW 756細胞系相關(guān)產(chǎn)品:G422細胞、RBL-1細胞、CCD 966SK細胞 H-2073細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Sf21細胞、KMB17細胞、Huh-7細胞 HCAEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH522細胞、H.Ep.-2細胞、PLC細胞 CCD-18Co細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TW 01細胞、NCI-157細胞、A2780 CP70細胞 HHFK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEMCSS細胞、MDA-MB-134細胞、Michigan Cancer Foundation-10A細胞 SK-N-BE(1)n細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NSC34細胞、H-2023細胞、EAHY-926細胞 Human Corneal Endothelial Cells-12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SGC-7901/DDP細胞、BAEC細胞、UPCI-SCC-154細胞 H2087細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MIN6細胞、HCC0827細胞、CCD-33Co細胞 Kobe university Oral Squamous Cell culture-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHEE細胞、NCI-H660細胞、NS-1-Ag4-1細胞 KM-H2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HMC-1細胞、CaSki細胞、KP-2細胞 SK MEL-28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mv 1 Lu細胞、SK-ChA1細胞、RGCs細胞 LU65細胞系相關(guān)產(chǎn)品:130 T細胞、H2405細胞、SW 1573細胞 NCI-H196細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIE-115細胞、Centre Antoine Lacassagne-12T細胞、L615細胞 LNT-229細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1435細胞、MAVER-1細胞、C-33A細胞 H1770細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-209細胞、HuH1細胞、Ku812細胞 HCO細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU368細胞、Wien 133細胞、SJSA-1細胞 GAK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RSC-364細胞、C-28I2細胞、SVEC4-10細胞 CHO K1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 78細胞、NCIH1623細胞、NCI-H82細胞 KU19-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEPa2細胞、GalK1細胞、PLB-985細胞 SUP-M2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW1271細胞、D283MED細胞、Baby Hamster Kidney-21細胞 H1581細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC-6細胞、L 132細胞、SPDC-CCL141細胞 NCI H548細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC 38細胞、MDAMB175VII細胞、AQ-Mel細胞 NCI-SNU-16細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IHH細胞、NTERA-2細胞、T98細胞 J774細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LuCL4細胞、SKM1細胞、H-2066細胞 University of Arizona Cell Culture-812細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI 231細胞、HCC-1143細胞、NCIH460細胞 J-111細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero 76 clone E6細胞、LAD2細胞、HT-22細胞 AG06814-N細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-838細胞、SKNO1細胞、TE8細胞 HEK-293-F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:201T細胞、NCI-H1048細胞、STO細胞 SCC25細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-940細胞、Intestinal Epithelioid Cell line No. 6細胞、P3-Jiyoye細胞 SCCVII/St細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc-327細胞、LNCaP-ATCC細胞、LS 180細胞 D562細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MIA-PaCa-2細胞、HFT8810細胞、SHSY5Y細胞 P3JHR-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SV40-MES13細胞、NCI-H920細胞、SKNBE細胞 H3255細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RCC-4細胞、KP4細胞、KU-812F細胞 PLB-985細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H676細胞、CAL 12細胞、KMH2細胞 NCI-H322細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM-T4細胞、MCA205細胞、BT 20細胞 UCLA-SO-14細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H650細胞、HDSMC細胞、H-711細胞 JB6 Cl 30細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MD Anderson-Metastatic Breast-435細胞、HEY-A8細胞、NCIH1184細胞 JM-1 Lymphoblastoid cells人B淋巴細胞瘤細胞系 HNE-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SP-2細胞、DMS 79細胞、NCI-SNU-119細胞 SLMT1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L 428細胞、LN-18細胞、HEK 293T/17細胞 OCUM-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-157細胞、QGY-7703細胞、LOU-NH91細胞 FRO 81-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hTERT-RPE1細胞、CC-LP-1細胞、Hela-mock細胞 "
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