"Reh Lymphoblastoid cells人急性非B非T淋巴細胞性白血病細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):淋巴母細胞樣 細胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復(fù)蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 OPM2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KP-N-YN細胞、SKRC 39細胞、RSC-364細胞 BEL7404細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Detroit562細胞、LNCaP FGC細胞、SACC83細胞 TE11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lung cancer-1/squamous細胞、OUMS-27細胞、U2OS細胞 細胞生長:懸浮 Reh Lymphoblastoid cells人急性非B非T淋巴細胞性白血病細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團一團地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細胞和你一樣,消化下來也是一團的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細胞生長挺快,那么細胞的增殖能力應(yīng)該較強。胰酶消化成團的問題我覺得有以下幾種可能:一、細胞消化后吹打不均勻,造成細胞成團生長:二、細胞細化太過,細胞成片脫落,吹打時沒有受力點,細胞聚團生長。解決辦法:根據(jù)細胞生長的情況進行多次消化,將同次消化下來的細胞放在一個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強,嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。我談?wù)剛€人經(jīng)驗:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時間可適當放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細胞傳代方法:1:2傳代。3天內(nèi)可長滿。 H-1417細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CFPAC1細胞、NCIH1581細胞、KOSC-2 cl3-43細胞 GM00637H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A101D細胞、SUDHL16細胞、IM-95細胞 RT112細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RS4;11細胞、P 815細胞、HaCaT細胞 NCIH1693細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C4-2 B細胞、Metastatic Variant-522細胞、COLO-320DM細胞 NCI-H660細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-MEL5細胞、GM03573細胞、LS 1034細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 Reh Lymphoblastoid cells人急性非B非T淋巴細胞性白血病細胞系 細胞生長特性:懸浮生長 細胞形態(tài)特性:淋巴母細胞 培養(yǎng)細胞真的不難,最關(guān)鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。 H1417細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jiyoye細胞、GM03671C細胞、GM2131細胞 PK136細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NFS60細胞、Vero-76細胞、Institute for Medical Research-90細胞 H-1781細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RD-2細胞、CHG-5細胞、HSC4細胞 REC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H-82細胞、MDA-MB 361細胞、SY5Y細胞 MC-26細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1428細胞、C3A細胞、Hs 683細胞 H-1355細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCC-HIE-2細胞、BERH-2細胞、UCLA NPA871細胞 MA-782細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NKT細胞、AR41P細胞、UCLA SO M14細胞 MDA-231細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOS(TE85)細胞、MNNG/HOS Clone F-5細胞、OC 316細胞 SKNBE(2)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:786-0WT細胞、HEL細胞、MDCK-2細胞 H2030細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Molm14細胞、CALU1細胞、L 1210細胞 Reh Lymphoblastoid cells人急性非B非T淋巴細胞性白血病細胞系 207細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHOS細胞、Panc-03.27細胞、HEC1-A細胞 LA-795細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NR 8383細胞、HTori 3細胞、DHL6細胞 KG1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE2M17細胞、U-87MG ATCC細胞、Hs 766T細胞 SuDHL 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSKMC細胞、BE2M17細胞、NCIH3255細胞 H-2286細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WERI Rb-1細胞、LSC-1細胞、Hs-578-T細胞 Hs600T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNK1細胞、Hs832T細胞、U20-S細胞 LN 229細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBMVEC細胞、SUM 52PE細胞、COLO-679細胞 SKMel-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WC00097細胞、Hepatoma-22細胞、HL-1細胞 NB1-RGB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:D10.G4.1細胞、SW 1116細胞、C-4 I細胞 Epstein-Barr-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SHG44細胞、Roswell Park Memorial Institute 2650細胞、NEC-8細胞 OVCAR.3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero C1008細胞、SKNEP1細胞、Madin Darby Canine Kidney細胞 Panc_05_04細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JIMT1細胞、H2172細胞、McARH7777細胞 HSC-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC3M-2B4細胞、OVCAR.8細胞、Ca Ski細胞 RPE D407細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM115F細胞、MGHU3細胞、SW-480細胞 OCILY3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Madison細胞、mouse Inner Medullary Collecting Duct-3細胞、HEK AD293細胞 P3 (Jiyoye)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hMSC-BM細胞、CCD-1095Sk細胞、B-95-8細胞 IALM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS273細胞、COS7細胞、C28/I2細胞 CFPAC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PJ34細胞、143B TK-細胞、G-402細胞 Jurkat 77細胞系相關(guān)產(chǎn)品:QBI-293A細胞、M.D. Anderson-Prostate Cancer-2b細胞、Kupffer細胞 Ly7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CBRH-7919細胞、H-748細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-453細胞 IMCD-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2009細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-2細胞、LIM 1215細胞 H498細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES-23.5細胞、NCI-H676細胞、Mel-MeWo細胞 BV2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 520細胞、HCC-2108細胞、SKG3A細胞 HCC941122細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1963細胞、Blotchy fibroblast-11細胞、H-1793細胞 CL40細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK-293H細胞、Immortal Pig Intestinal-2I細胞、B16BL-6細胞 University of Michigan-Urothelial Carcinoma-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC366細胞、CG4細胞、COLO-680N細胞 RFL6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1197細胞、CAKI.1細胞、COLO 738細胞 SCCVII/St細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc-327細胞、LNCaP-ATCC細胞、LS 180細胞 SK-MEL-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H28細胞、Mel624細胞、NCI-SNU-C1細胞 Nb-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C666-1細胞、SK MEL 5細胞、CL40細胞 ROS17/2.8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WERI細胞、HOS TE 85細胞、SKNAS細胞 PZ-HPV-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-216細胞、174xCEM.T2細胞、HEK-293FT細胞 COLO-357細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU449細胞、S91細胞、MM1.S細胞 HT 29細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TM4細胞、G361-mel細胞、SRA01/04 (HLE)細胞 N1E115細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ST-2細胞、Calu-6細胞、Kit225 K6細胞 CCC-HEL-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF763細胞、MDA.MB.231細胞、WM-266-mel細胞 PY8119細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Lu-165細胞、LN382細胞、BC-022細胞 S16細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MS751細胞、Hep 3B2細胞、BEL-7404細胞 RKOE6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM 190PT細胞、BCECs細胞、BC-3-H-I細胞 MUTZ3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero-76細胞、HCC202細胞、HUCCT1細胞 KASUMI6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1435細胞、OCI/AML-3細胞、RMG1細胞 OCIAML2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DF1細胞、Hk-2細胞、GM00637I細胞 BSC-40細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC/9細胞、WiDrTC細胞、ANA1細胞 IHH細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS5細胞、Jurkat-E6細胞、LPC-H12細胞 J111細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH650細胞、Hs819T細胞、University of Michigan-Urothelial Carcinoma-14細胞 KE-37細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KE39細胞、6-T CEM細胞、HM1900細胞 Hmy.2 CIR細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Balb/c3T3細胞、NE1細胞、KYSE 450細胞 Neuro-2a細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBSMC細胞、IOSE80細胞、Madin Darby Bovine Kidney細胞 MDAMB361細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuH-6細胞、SW1783細胞、HT1080細胞 MDA-MB-175-VII細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-1463細胞、KOSC2細胞、NB.4細胞 NCI-H250細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-295細胞、H1341細胞、NCI-H226細胞 Reh Lymphoblastoid cells人急性非B非T淋巴細胞性白血病細胞系 P30 OHK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ly1細胞、M-1細胞、SK-MEL-31細胞 Walker256細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1993細胞、Panc-327細胞、NCIH2073細胞 NCI-H1836細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GRSL細胞、FHL 124細胞、SK-GT-4細胞 H1781細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MAC1細胞、RAW 264.7細胞、PK15細胞 "
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