"MT-4 Lymphoblastoid cells人急性淋巴母細胞白血病細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):淋巴母細胞樣 細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當(dāng)會事。 NRK-52E細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Wistar Institute, Susan Hayflick細胞、Mia PACA 2細胞、PC9細胞 AM-38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NRK52E細胞、EBNA-293細胞、HN-6細胞 HN-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ANA-1細胞、MDA-MB 453細胞、OSA細胞 細胞生長:懸浮 MT-4 Lymphoblastoid cells人急性淋巴母細胞白血病細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞復(fù)蘇基本方法:1.從液氮罐中取出安剖;有時因安剖未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套。2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時搖動,盡快解凍。3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細胞懸液,裝入離心管中,再補加10ml培養(yǎng)液,吹打使細胞懸浮。4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。收到T25 flask細胞時,處理方式為:在寄送過程中,為避免起泡造成細胞脫落死亡,T25 flask均加滿培養(yǎng)基。請檢查flask外觀,并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象,若有任何問題,不要打開蓋子,請立即通知細胞實驗室。將原封之T25 flask靜置于37°C,5%CO2培養(yǎng)箱中,使細胞回溫至37°C,并讓運送過程中少數(shù)脫落的細胞可再附著生長。隔天后,于無菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基(取出之培養(yǎng)基可以再使用),僅留約5-10ml培養(yǎng)基于flask內(nèi),依一般培養(yǎng)方式再將細胞置入培養(yǎng)箱中,或細胞已長滿盤,則將細胞做傳代培養(yǎng)。 細胞傳代方法:1:2傳代 C32-mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GLAG-66細胞、huH 1細胞、WEHI-279細胞 SW1463細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H69細胞、SF539細胞、TE1細胞 CAL120細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IMR90細胞、OCILY-19細胞、RK-13細胞 T98-G細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-28細胞、D341 Med細胞、OV1/P細胞 DLD-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1419細胞、BGC-823細胞、LS1034細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 MT-4 Lymphoblastoid cells人急性淋巴母細胞白血病細胞系 細胞生長特性:懸浮生長 細胞形態(tài)特性:淋巴母細胞樣;圓形 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟龋绻麣鉁氐陀冢炊鹊?,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 OCI/AML-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDST8細胞、293FT細胞、He La細胞 118 MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HNE3細胞、LK-2細胞、B16/F10細胞 Caco-2/ATCC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1944細胞、R D細胞、SUD4細胞 NL20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RIN m5F細胞、MLFC細胞、LTEP-sm 1細胞 L-WRN細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC-1細胞、NCIH1836細胞、CW-2細胞 MDCK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-BR-3細胞、PNEC30細胞、293/EBNA-1細胞 BI-Mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KHYG-1細胞、SkChA1細胞、SW.620細胞 NCI/ADR-RES細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FM-88細胞、DC 2.4細胞、L-cell細胞 NTERA-2 clone D1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H226細胞、H-226細胞、C81-61細胞 Lymph Node Carcinoma of the prostate細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1623細胞、H-719細胞、OVSAHO細胞 MT-4 Lymphoblastoid cells人急性淋巴母細胞白血病細胞系 NB19-RIKEN細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MODE-K細胞、NCI-H2342細胞、IPEC-J2細胞 TE13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1944細胞、GM05372細胞、CT26.CL25細胞 TPC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OUMS23細胞、D407 RPE細胞、RTE細胞 TE-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Intestinal Epithelial Cell-6細胞、MGH-UI細胞、H2291細胞 SN-12C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BRL 3A細胞、KM.12細胞、MCF7細胞 SNU-182細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B-104細胞、Hep 3B細胞、MDA-MB-175細胞 SNU-182細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B-104細胞、Hep 3B細胞、MDA-MB-175細胞 Rainbow Trout Embryo細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SupB15W細胞、BOWES細胞、TOG細胞 VK-2/E6E7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS-445細胞、HT(H9)細胞、GLC82細胞 P3/NS-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:3LL細胞、SUM-102PT細胞、IPLB-Sf21細胞 HTR8svn細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-9204細胞、Panc3_27細胞、HT-144細胞 MDA-MB-330細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-226AR1細胞、SNU-216細胞、HLE B-3細胞 MiaPaCa-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TW-039細胞、FET細胞、Potorous tridactylus Kidney 1細胞 MDA134細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBL 1細胞、H-1993細胞、MDCK細胞 SW-13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B35細胞、RH35細胞、MCF-7B細胞 alpha TC1.6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO1N1細胞、MIN-6細胞、BC-024細胞 BT549細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC1-A細胞、U343MG細胞、DMS79細胞 NCI N87細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGC-803細胞、MV4-11細胞、NCIH208細胞 SGC-7901細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH596細胞、NK-92細胞、V-79-4細胞 HEC-151細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HepG2-luc細胞、H358細胞、T2 (174 x CEM.T2)細胞 NK-92 MI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2291細胞、GP293細胞、BE(2)M17細胞 Mouse Colon 38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KTC1細胞、SNU-484細胞、MDA-231細胞 CCD33Co細胞系相關(guān)產(chǎn)品:T-47D細胞、U118-MG細胞、Leukemia L1210細胞 NCI-H-69細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DHL-8細胞、HCT116細胞、Fao細胞 KYSE0410細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H929細胞、GTL-16細胞、SKG-IIIa細胞 NCI-H69C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK.MEL.28細胞、KNS42細胞、HEK;293細胞 Ej138細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hi5細胞、MB-49細胞、G422細胞 HEK293EBNA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OACP4 C細胞、NCIH2110細胞、3AA細胞 H2347細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ChaGo-K1細胞、P388細胞、Centre Antoine Lacassagne-148細胞 FC33細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MonoMac1細胞、HEK-A細胞、AM38細胞 MS751細胞系相關(guān)產(chǎn)品:INS1細胞、EJ 138細胞、HEK-293 c18細胞 H-735細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P30/Ohkubo細胞、LS 1034細胞、IPAM-WT細胞 H-322細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LOU-NH91細胞、NCI-H125細胞、KLM1細胞 HMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM-CCRF (CAMR)細胞、624 MEL細胞、GM2132細胞 P-388細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ACC-3細胞、SKNBE2細胞、HLF細胞 H1417細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jiyoye細胞、GM03671C細胞、GM2131細胞 MDAMB-231細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KTCTL140細胞、SUM 149PT細胞、PC3-M細胞 UACC 812細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RL-952細胞、VMM5細胞、Tu212細胞 Granta 519細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HET-1A細胞、J 774A.1細胞、Central Adrenergic TH-expressing a細胞 PLC-8024細胞系相關(guān)產(chǎn)品:aTC1-6細胞、BT-B細胞、AMC-HN8細胞 NCIH2110細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL1.0細胞、SK-N-BE(1)細胞、LA 4細胞 H-2170細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WILL-2細胞、Y-79細胞、RN-c細胞 HCM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK-AD293細胞、AG 9細胞、WIL2-S細胞 GCT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BRL-3A細胞、M1細胞、EFM-192B細胞 NCIH1838細胞系相關(guān)產(chǎn)品:High Five細胞、A-20細胞、RMS 1598細胞 MIN6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1568細胞、10RGB細胞、LS 123細胞 LUDLU 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC9204細胞、CCD841CoTr細胞、NPC-TW-039細胞 SW-780細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-251 MG細胞、Kasumi 1細胞、ID8細胞 ACCM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rat Skin 1細胞、143B細胞、SW626細胞 Cloudman M3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Dami細胞、Hs600T細胞、H1650細胞 L363細胞系相關(guān)產(chǎn)品:alpha-TC1-6細胞、H1568細胞、S180細胞 MT-4 Lymphoblastoid cells人急性淋巴母細胞白血病細胞系 UMRC-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBL細胞、NCI-H740細胞、CMT-93細胞 HBVSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL-27細胞、PG-LH7細胞、G402細胞 H-250細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H520細胞、DHBE細胞、OLN-93細胞 Caco-2/ATCC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1944細胞、D324 Med細胞、CMT 167細胞 "
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