"IPEC-1 epithelioid cells豬小腸上皮細胞系 細胞背景資料:小腸;上皮細胞;自發(fā)永生 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復(fù)蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當會事。 Line 870 Emory University-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD841CoTr細胞、U343細胞、Wien-133細胞 PLA801-95C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-HUT-292細胞、SK Mel 1細胞、H841細胞 Nakata-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2172細胞、JVM-2細胞、NCIADRRES細胞 細胞生長:貼壁 IPEC-1 epithelioid cells豬小腸上皮細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%,必須預(yù)留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常會誤認為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會使此沈淀物增多,更會誤認為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測,又沒有污染。一般而言,此小黑點應(yīng)不會影響細胞之生長,但若懷疑此血清之品質(zhì),應(yīng)立即停用,更換另一批號的血清。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 SK-N-BE2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNT8細胞、NCI-H676B細胞、SUM159細胞 BTT739細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-937細胞、H1869細胞、My-La 2059細胞 LS 513細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H292細胞、Molm14細胞、XuanWei Lung Cancer-05細胞 MM1.S細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TKB1細胞、LM8細胞、V-79細胞 HuT78細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3J HR1-K細胞、MHCC 97細胞、TALL-1 [Human adult T-ALL]細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 IPEC-1 epithelioid cells豬小腸上皮細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復(fù)蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 COLO 205細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H4-II-E細胞、SUM 102PT細胞、COLO_320DM細胞 MSTO-211 H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1666細胞、L5178Y-R細胞、Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2細胞 293H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SMC-1細胞、HEK (AD293)細胞、MSB-1細胞 174xCEM.T2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H446細胞、GA10細胞、H-460細胞 C2-C12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AQ-Mel細胞、WEHI3細胞、KYSE-450細胞 TSCCa細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UWB1-289細胞、Hs 863.T細胞、OCI-LY-8細胞 H-660細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63細胞、WM266mel細胞、Y3-Ag123細胞 NG108-15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MRAEC細胞、Centre Antoine Lacassagne-78細胞、AA-Mel細胞 Hs606T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FL-83B細胞、H322細胞、HCC2935細胞 NCI-H2087細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW962細胞、2B4細胞、KYSE30細胞 IPEC-1 epithelioid cells豬小腸上皮細胞系 2BS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:alphaTC1 Clone 6細胞、NCI-H2030細胞、H69細胞 HCC1954-BL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK-A細胞、SK-MEL-3細胞、MyLa 2059細胞 RK13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCLP1細胞、AMJ2C8細胞、H-2444細胞 HEL9217細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kato-III細胞、H1836細胞、TE 85.T細胞 BaF3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ECV304細胞、NCIH526細胞、H-1437細胞 HEK293E細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI-7951細胞、H920細胞、Tn-5B1-4細胞 HEK293E細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI-7951細胞、H920細胞、Tn-5B1-4細胞 CoCL3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1355細胞、H2228細胞、T-ALL1細胞 NTC-200細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc-05.04細胞、MDAMB-231細胞、K7M2 wt細胞 EU-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-11細胞、Roswell Park Memorial Institute 7951細胞、NCI-H1404細胞 Walker/LLC-WRC256細胞系相關(guān)產(chǎn)品:INS1-E細胞、CL1-0細胞、Vero 76 clone E-6細胞 BT-483細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C8161細胞、JROECL33細胞、U-87-MG細胞 CFSC-8B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-6 myoblast細胞、HCAEC細胞、M20 [Human melanoma]細胞 BMSCs(mBMSCs)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-2OS細胞、Cloudman S91 melanoma細胞、BALB/3T3 (clone A31)細胞 KM H-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1838細胞、Kit 225細胞、AZ521細胞 SY5Y細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DBTRG-05MG細胞、BHT-101細胞、TE11細胞 3 LL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UM-UC14細胞、NCI-H1954細胞、GM03671細胞 MRC-V細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Pancreatic Duct Epithelial細胞、HSC 3細胞、HO8910細胞 RBL2H3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:b.End3細胞、NCTC 929細胞、NCI-SNU-449細胞 RBL2H3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:b.End3細胞、NCTC 929細胞、NCI-SNU-449細胞 SCC090細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A673細胞、MOLM13細胞、Lewis Lung細胞 HT-1080細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AMJ2C8細胞、Capan-2細胞、U266細胞 32Dcl3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NIH3T3細胞、A 2780 CP細胞、WPMY-1細胞 SNU-878細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HR8348細胞、OCI-Ly 1細胞、NCI-SNU-878細胞 RSC-96細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKRC-52細胞、769-P細胞、SUM 52PE細胞 ME16C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H250細胞、Hs-611-T細胞、3T3J2細胞 BV173細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RGC-5細胞、RBL.2H3細胞、HS-445細胞 CFPAC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PJ34細胞、143B TK-細胞、G-402細胞 MIA PaCa-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H82細胞、SP2細胞、DoTc2-4510細胞 CT26WT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RAW-264.7細胞、hRMECs細胞、P3JHR-1細胞 REC 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-4006細胞、U266B1細胞、HOS (TE85, Clone F5)細胞 Hs-343-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FL83B細胞、RCK-8細胞、HCT FET細胞 NU-GC-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGC803細胞、ACCM細胞、MC 116細胞 RCF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HA細胞、Malme-3 M細胞、MRASMC細胞 SNU-407細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-44細胞、SK UT 1細胞、TE-1細胞 NCI-H2286細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SBC-5細胞、OVCAR.4細胞、NTera2/D1細胞 HCC1187細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ARIP細胞、BNL.CL2細胞、MM6細胞 H64細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EC109細胞、NCI H82細胞、PLC PRF 5細胞 COLO829細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS-695T細胞、L-02細胞、H341細胞 HMEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE(2)-M17細胞、SKGT4細胞、QGP 1細胞 Hmy.2 CIR細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Balb/c3T3細胞、NE1細胞、KYSE 450細胞 UPCI-SCC-154細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-28/I2細胞、NCIH209細胞、WM-115細胞 VeroE6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HANK細胞、SF 767細胞、A-20細胞 U118-MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SV-HUC細胞、brain-derived Endothelial cells.3細胞、GH 3細胞 NR-8383細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU4細胞、NK92細胞、HFL 1細胞 NCTC clone 1469細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 729T細胞、Centre Antoine Lacassagne-27細胞、WM 239細胞 OV-2008細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPAM-WT細胞、MHCCLM3細胞、R1610細胞 WRL-68細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS411細胞、MeT-5A細胞、SUDHL-5細胞 3T3 Swiss Albino細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVTOKO細胞、BNL CL2細胞、CCK81細胞 NCI-H747細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C 6細胞、BIC-1細胞、MDAMB134VI細胞 IAR-20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LM1細胞、VA-ES-BJ細胞、BE(2)-M17細胞 IPEC-1 epithelioid cells豬小腸上皮細胞系 GOTO細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MTC-TT細胞、OV 1063細胞、KRC-Y細胞 MNNG-HOS (Cl#5)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P31-FUJ細胞、NOR10細胞、FaDu細胞 P116細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MH-22a細胞、Be Wo細胞、H125細胞 293H細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SMC-1細胞、NPA87細胞、H-1373細胞 "
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