"G-Olig2 epithelioid cells小鼠胚胎干細胞系 細胞背景資料:胚胎干細胞;129X1/SvJ 細胞形態(tài):上皮細胞樣 正確的細胞復蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復蘇。那么,細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復蘇。在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 Michigan Cancer Foundation-10A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ST486細胞、VP303細胞、3T3-J2細胞 SUM 149PT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:3-LL細胞、SHEE細胞、PE CA PJ34細胞 Becker細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WI38細胞、L cell line細胞、PCI:SG231細胞 細胞生長:貼壁 G-Olig2 epithelioid cells小鼠胚胎干細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞培養(yǎng)中支原體污染的經(jīng)驗分享:支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細胞,也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色,用姬姆薩染色很淺,革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養(yǎng)中生長,營養(yǎng)要求比細菌高。細胞培養(yǎng)(特別是傳代細胞)被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養(yǎng)中支原體感染發(fā)生率達到63%,支原體感染發(fā)生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達,又不能通過可視法對其進行檢測,而且它對細胞的生長率影響較小,不易引起注意。國內(nèi)外研究表明,95%以上是以下四種支原體:口腔支原體(M.orale)、精酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見的污染細胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細胞的支原體種類是很多的,國外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細胞,有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染、操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。組織細胞培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預防支原體的污染:控制環(huán)境污染;嚴格實驗操作;細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌;在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒有細胞壁,一般來講,對作用于細胞壁生物合成的抗生素,如萬古霉素等完全不敏感;對多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類及一些喹諾酮;其他類抗生素如基糖苷類、霉素對支原體有較小抑制作用,所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 CNE1-LUC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE3A細胞、C643細胞、H-889細胞 U373細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ASPC1細胞、BIC1細胞、Y-79細胞 WM-266-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD-966SK細胞、T-HSC細胞、MCF-7/ADR-RES細胞 PA12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:R-1059-D細胞、Tadarida brasiliensis 1 lung細胞、EMT-6細胞 NCIH1650細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MUTZ1細胞、Anip973細胞、32Dc3細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 G-Olig2 epithelioid cells小鼠胚胎干細胞系 細胞生長特性:貼壁 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 MLE12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KATO 3細胞、Hs 606.T細胞、SK-ES1細胞 KMS-26細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ARH-77細胞、H-2110細胞、HME1細胞 SKRC-20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2342細胞、JOSK-M細胞、SUM 52細胞 CHO-Lec1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1963細胞、H4-II-EC3細胞、A2780CP細胞 Molm 13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NTERA2-cloneD1細胞、PNT1/A細胞、SK-NSH細胞 GM04679細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK-2細胞、CO115細胞、SK-RC-42細胞 RGC5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HeLa.S3細胞、L- cell細胞、SW839細胞 NCI-H740細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LA-N-6細胞、AM細胞、Panc_08_13細胞 MILE SVEN 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AN3 CA細胞、Ha Fe細胞、GM04154細胞 CV-1.K細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVMANA細胞、Ku812F細胞、RH8994細胞 G-Olig2 epithelioid cells小鼠胚胎干細胞系 SKG-3a細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TALL1細胞、NIT-1細胞、Hs 604.T細胞 B16 subline B78細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMEL-2細胞、DMS-273細胞、CALU1細胞 NCIH1573細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CT26細胞、KYSE50細胞、MOVAS細胞 COLO206細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NALM-6-M1細胞、H-II-E-C3細胞、SU-DHL-16細胞 HO1-N-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:143TK-細胞、NCIH847細胞、YD15細胞 373MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:624 MEL細胞、ARPE19細胞、HMEL細胞 373MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:624 MEL細胞、ARPE19細胞、HMEL細胞 SW-1116細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CL1細胞、Transformed Human Liver Epithelial-3細胞、MODE-K細胞 IOSE-Mar細胞系相關(guān)產(chǎn)品:4T1-A細胞、GM02132細胞、SEG1細胞 High Five細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KLN-205細胞、SW-48細胞、D-341細胞 HUVEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:QG-56細胞、HCC0078細胞、CL1-5細胞 Hs 870.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPVSMC細胞、MRC5細胞、KYSE510細胞 SK Hep1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:D-324MED細胞、Murine Lung Epithelial-12細胞、CCD841CoTr細胞 Ej138細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hi5細胞、MB-49細胞、G422細胞 UCLA NPA-87-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-16細胞、MHCC97-L細胞、HCC78細胞 NU-GC-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGC803細胞、ACCM細胞、MC 116細胞 SH-SY5Y Parental細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE-70細胞、YD38細胞、Calu6細胞 Karpas422細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 12細胞、Hepa 1-6細胞、W133細胞 HSC-I細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H69細胞、Co 205細胞、HKC細胞 SKNO-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-151細胞、IEC-18細胞、C32 [Human melanoma]細胞 SKMEL24細胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D clone 3細胞、UMNSAH/DF-1細胞、RGC6細胞 CMT-64細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GP2d細胞、tdott細胞、UMNSAH-DF1細胞 BC-027細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOVAS細胞、SW 620細胞、CT-26 WT細胞 JKT1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hi-5細胞、PC3M-1E8細胞、CAL 120細胞 H-1105細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UWB1289細胞、Pt K2 (NBL-5)細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-330細胞 MCF 7B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:J-111細胞、CCD 1112SK細胞、Hep 2細胞 PAN 02細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MFM-223細胞、MTEC1細胞、RAW-264.7細胞 EBTr (NBL-4)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hep3B細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-134-VI細胞、HHL5細胞 RPMI-7666細胞系相關(guān)產(chǎn)品:T HEECs細胞、NTERA-2/D1細胞、Hs281T細胞 GFP-Olig2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hTERT-RPE細胞、AML 12細胞、NCIH1618細胞 HUC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FK81細胞、HuT78細胞、OSK-1細胞 MGECs細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKBR-3細胞、Hs 611.T細胞、QBC(939)細胞 AM-38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NRK52E細胞、EBNA-293細胞、HN-6細胞 Hs606細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JHH7細胞、HDMEC細胞、Panc 8.13細胞 H-1694細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEL 92.1.7細胞、526-mel細胞、SKMEL-2細胞 BE2C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H.Ep.-2細胞、DLD1細胞、LA4細胞 PA12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:R-1059-D細胞、Tadarida brasiliensis 1 lung細胞、EMT-6細胞 CCRF-SB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RT-BM 1細胞、NS1-1 Ag4.1細胞、C12細胞 HIT-T15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SMA560細胞、H747細胞、SNU886細胞 Human Embryo Lung-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1437細胞、SKNBE(1)細胞、TKB-1細胞 OCI/AML-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IGR.OV1細胞、PTK 2細胞、COLO 16細胞 SKUT1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tn5 B1-4細胞、Calf Pulmonary Artery Endothelial細胞、HepG2細胞 P815細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKMEL2細胞、NPA'87細胞、hFOB 1.19細胞 TOG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Human Epidermoid carcinoma #2細胞、H441細胞、CCRF-SB細胞 OV-1063細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C127細胞、SKMES1細胞、HCT-15細胞 A2008細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OsACL細胞、AU-Mel細胞、H-35 Reuber細胞 CCRF-CEM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-601細胞、ZR-75-1細胞、OCLY8細胞 OVCAR.4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRF/CEM細胞、BeWo細胞、MDCC MSB1細胞 RBL2H3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:b.End3細胞、NCTC 929細胞、NCI-SNU-449細胞 Fao細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI #8226細胞、Keio University-19-19細胞、BEL 7402細胞 OV-90細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3JHR-1細胞、RK-13細胞、OK-WT細胞 G-Olig2 epithelioid cells小鼠胚胎干細胞系 PC-3M-IE8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB-231-GFP細胞、M059J細胞、CCK-81細胞 WM-115細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1944細胞、V-79細胞、Pt K2細胞 ADR-RES細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SG231細胞、C918細胞、SGC-996細胞 SKRC-20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2342細胞、Line 697細胞、CNE2Z細胞 "
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