"Y1 epithelioid cells小鼠腎上腺皮質(zhì)瘤細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):上皮細胞樣 正確的細胞復(fù)蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 SW-1783細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRhK4細胞、CHOK1細胞、U14細胞 207細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHOS細胞、Panc-03.27細胞、HEC1-A細胞 EC-GI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MV-3細胞、PK13細胞、293-GP細胞 細胞生長:貼壁 Y1 epithelioid cells小鼠腎上腺皮質(zhì)瘤細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞復(fù)蘇基本方法:1.從液氮罐中取出安剖;有時因安剖未封嚴,浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套。2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時搖動,盡快解凍。3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細胞懸液,裝入離心管中,再補加10ml培養(yǎng)液,吹打使細胞懸浮。4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。收到T25 flask細胞時,處理方式為:在寄送過程中,為避免起泡造成細胞脫落死亡,T25 flask均加滿培養(yǎng)基。請檢查flask外觀,并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象,若有任何問題,不要打開蓋子,請立即通知細胞實驗室。將原封之T25 flask靜置于37°C,5%CO2培養(yǎng)箱中,使細胞回溫至37°C,并讓運送過程中少數(shù)脫落的細胞可再附著生長。隔天后,于無菌操作箱內(nèi)取出flask內(nèi)之培養(yǎng)基(取出之培養(yǎng)基可以再使用),僅留約5-10ml培養(yǎng)基于flask內(nèi),依一般培養(yǎng)方式再將細胞置入培養(yǎng)箱中,或細胞已長滿盤,則將細胞做傳代培養(yǎng)。 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 T-84細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-RC 39細胞、HCC1500細胞、BHP10-3細胞 Hs688(A)T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM266-4細胞、mousepodocyte細胞、HTR8/SVneo細胞 NP69細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2023細胞、LM(TK-)細胞、NCI-H1573細胞 HEK;293細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1954 BL細胞、B16/F1細胞、PaTu 8988 S細胞 F442A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TO 175.T細胞、H23細胞、SN12-PM6細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 Y1 epithelioid cells小鼠腎上腺皮質(zhì)瘤細胞系 細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導(dǎo)致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復(fù)蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 HT-22細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC 70細胞、Lewis lung carcinoma line 1細胞、Walker 256細胞 H35細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV 2008細胞、6T-CEM細胞、OVCAR8細胞 KP-N-RT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1563細胞、Ca-Ski細胞、HG2855細胞 PAI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UPCISCC090細胞、MS751細胞、H1404細胞 Hs281T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBdSMC細胞、T9細胞、MC3T3-E1 Subclone 4細胞 BpRc1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hTERT-HME1細胞、H1048細胞、IM-9細胞 OE33細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPMC細胞、Ramos 2G6 4C10細胞、SK Hep1細胞 FUOV1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO320 DM細胞、MonoMac 6細胞、MNNGHOS細胞 LN 229細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBMVEC細胞、SUM 52PE細胞、COLO-679細胞 KG1A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colon-26細胞、UWB1.289+BRCA1細胞、Anip973細胞 Y1 epithelioid cells小鼠腎上腺皮質(zhì)瘤細胞系 HEK293-EBNA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc 2.03細胞、Hs746T細胞、U-937細胞 CLONE M3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-X63-Ag 8.653細胞、A3細胞、HPAF-II細胞 J 111細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2030細胞、MRMT-1細胞、L929細胞 H-1623細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOP-92細胞、Caki-2細胞、MFM-223細胞 Balb/c3T3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPLB-SF 21AE細胞、DLM8細胞、BL6細胞 Reuber-H-35 hepatoma細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1588細胞、MPC5細胞、SW-527細胞 Reuber-H-35 hepatoma細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-1588細胞、MPC5細胞、SW-527細胞 MGC-803細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NMC-G1細胞、Leukemic 1210細胞、SKMEL-24細胞 HUT 226細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC-2185細胞、HCoEpiC細胞、CMT 167細胞 SW 756細胞系相關(guān)產(chǎn)品:G422細胞、RBL-1細胞、CCD 966SK細胞 HC11 Mammary Epithelium細胞系相關(guān)產(chǎn)品:F98細胞、H-1734細胞、4T1.2細胞 L-cells細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UPCI-SCC-090細胞、HCT 116細胞、Hopkins-92細胞 G401細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PaTu-8988s細胞、GM03571細胞、H322細胞 EO771細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH841細胞、BALB/3T3 cl. A31細胞、Hs 852.T細胞 293-FT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3-NS1/1Ag 4.1細胞、H-2066細胞、LADMAC細胞 Hs445細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-RC-39細胞、CAL85-1細胞、CEM-C1細胞 NCI-H1836細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GRSL細胞、WM 266-4細胞、Jurkat 77細胞 HGSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE12細胞、RC92A細胞、NCI H82細胞 HSKMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C8166-CD4細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-157細胞、SIRC細胞 HSKMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C8166-CD4細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-157細胞、SIRC細胞 H-1184細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES23.5細胞、Hamster Islet Transformed-Tioguanine resistant clone 15細胞、MH-22a細胞 WEHI 164細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFLS-OA細胞、H-250細胞、Neuro-2a細胞 Hs 739.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U138-MG細胞、HUVSMC細胞、OVCA 432細胞 HFLS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MPC11細胞、HCC-9204細胞、HEM細胞 HGC27細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK BR 03細胞、MDA-134細胞、Hep G2細胞 SKNEP-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HuLEC-5a細胞、KM-12細胞、786-O細胞 MDA-MB-231細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE70細胞、MLA-144細胞、CTX TNA2細胞 KYSE180細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RSC-96細胞、SU4細胞、JROECL21細胞 Roswell Park Memorial Institute 7951細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-ADR-RES細胞、SKN-AS細胞、A-375.S2細胞 Roswell Park Memorial Institute 7666細胞系相關(guān)產(chǎn)品:G-Olig2細胞、Centre Antoine Lacassagne-85-1細胞、Wistar Institute-38細胞 CTV1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Intestinal Epithelioid Cell line No. 6細胞、NEC細胞、PANC.1細胞 RMG-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:V79-GalK1細胞、LOU-NH-91細胞、OSC-19細胞 MV 4;11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 140細胞、CV-1.K細胞、RAW2647細胞 SP2-0-Ag14細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KNS-81細胞、Toledo細胞、MHH-CALL2細胞 NIE 115細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16-F10-BL6細胞、Bac1 2F5細胞、NCIH1395細胞 SF295細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2081細胞、Lu-165細胞、PK136細胞 U-118-MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KP4細胞、Hs611T細胞、NB-9細胞 Hs888T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C4 I細胞、LPC-H12細胞、GOS3細胞 NCIH510細胞系相關(guān)產(chǎn)品:N-9細胞、HCT GEO細胞、SNU-886細胞 A 2058細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-BE2C細胞、G-292, clone A141B1細胞、LS 174 T細胞 Hs 870.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPVSMC細胞、MRC5細胞、KYSE510細胞 TO 175.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RAW264.7細胞、HCC70細胞、SCL2細胞 He La細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C81-61細胞、EST50細胞、M210B4細胞 GM07404A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU407細胞、HTori-3細胞、CTLL(2)細胞 Pro-5WgaRI3C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-SNU-423細胞、NCIH69細胞、Hs 934.T細胞 HS-294細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KPL-4細胞、RIN-m5F細胞、Huh 7.5細胞 SUM 149細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Detroit-562細胞、CHL1細胞、HT(H9)細胞 LN-382細胞系相關(guān)產(chǎn)品:W256細胞、SVGp12細胞、U-266細胞 OVCA433細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EC-9706細胞、JCA-1細胞、NCI-H2029細胞 Mv1Lu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63-Ag8.653細胞、KU-812細胞、BIU-87細胞 SN-12C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BRL 3A細胞、KM.12細胞、MCF7細胞 Y1 epithelioid cells小鼠腎上腺皮質(zhì)瘤細胞系 SK-ES細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LK 2細胞、Emory University-3細胞、U-138 MG細胞 C127細胞系相關(guān)產(chǎn)品:M 1細胞、Kuramochi細胞、SNU668細胞 FRO81-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RIN-m細胞、TR-146細胞、SW1088細胞 KP-N-RT-BM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT-116細胞、SMMC-7721細胞、PC-9/S1細胞 "
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