"NCI-H1876 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:詳見相關(guān)文獻(xiàn)介紹 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞凍存復(fù)蘇材料與方法步驟:常用的細(xì)胞冷凍貯存器為液氮貯存器,規(guī)格有35L和50L兩種。使用時(shí)要注意以下幾點(diǎn):(1)一般兩周需充液氮一次,至少一個(gè)月充氮一次。液氮溫度達(dá)-196℃,使用時(shí)注意勿讓液氮濺到皮膚上,以免引起凍傷。(2)液氮容器為雙層結(jié)構(gòu),中間為真空層,瓶口有雙層焊接處,應(yīng)防止焊接部裂開。(3)在裝入液氮時(shí),要注意緩慢小心,并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導(dǎo),使液氮直達(dá)瓶底,如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用,加液氮時(shí)更要緩慢,以免溫度驟降而使容器損壞。細(xì)胞凍存時(shí)常備的材料有:0.25%胰蛋白酶,含10%~20%的血清培養(yǎng)液,DMSO(分析純)或無(wú)色新鮮甘油(121°C蒸氣高壓消毒),2mL安瓿(或?qū)S眉?xì)胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為:(1)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng) 液去掉,用0.25%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶,加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。(2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基,于4℃預(yù)冷15分鐘后,逐滴加入已無(wú)菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,細(xì)胞濃度為3×106~1×107/mL之間。(3)將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)S美鋬鏊芰瞎苤校碴逞b1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要完全封閉,圓滑無(wú)勾。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期,同時(shí)作好登記(日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù))。(4)將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過(guò)夜,次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時(shí),再移至冰箱冷凍室內(nèi)3~4小時(shí),再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時(shí),最后沉入液氮中。細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),觀察生長(zhǎng)情況,然后再繼續(xù)凍存。 Pt-K2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA 231-LM2-4175細(xì)胞、HFT-8810細(xì)胞、HKF細(xì)胞 ECC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC3T3-E1 Subclone 24細(xì)胞、GM-3573細(xì)胞、DKMG細(xì)胞 OCI/AML-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IGR.OV1細(xì)胞、PTK 2細(xì)胞、COLO 16細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):貼壁 NCI-H1876 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞物種來(lái)源:人源或鼠源等其它物種來(lái)源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 為了防止因污染或技術(shù)原因使長(zhǎng)期培養(yǎng)功虧一簣,考慮到培養(yǎng)細(xì)胞因傳代而遲早會(huì)出現(xiàn)變異,有時(shí)因寄贈(zèng)、交換和購(gòu)買,培養(yǎng)細(xì)胞從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室,的策略是進(jìn)行低溫保存。這對(duì)于維持一些特殊細(xì)胞株的遺傳特性極為重要?,F(xiàn)簡(jiǎn)要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點(diǎn)。細(xì)胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時(shí),細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止,即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài),故可以長(zhǎng)期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵,在于通過(guò)0~20℃階段的處理過(guò)程。在此溫度范圍內(nèi),水晶呈針狀,極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:凍存細(xì)胞較脆弱,要輕柔操作。凍存細(xì)胞要快速融化,并直接加入完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。若細(xì)胞對(duì)凍存劑(DMSO或甘油)敏感,離心去除凍存培養(yǎng)基,然后加入完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。直接鋪板方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基鋪板細(xì)胞。1ml凍存細(xì)胞使用10~20ml完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基。進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),細(xì)胞接種應(yīng)該至少在3×10(5)活細(xì)胞/ml;培養(yǎng)細(xì)胞12到24小時(shí),更換新鮮的完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基,去除凍存劑。離心方法:取出貯存細(xì)胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml凍存細(xì)胞加入到大約25ml完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基,輕輕混勻;以大約80x離心2到3分鐘;棄去上清。在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基輕輕再次懸浮細(xì)胞,并且進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。細(xì)胞鋪板,細(xì)胞接種應(yīng)該至少為3×10(5)活細(xì)胞/ml。細(xì)胞的分化:一個(gè)成年人全身細(xì)胞總數(shù)約1012個(gè),可以區(qū)分為200多種不同類型的細(xì)胞:形態(tài)結(jié)構(gòu),代謝,行為,功能等各不相同。追根溯源,這么多種細(xì)胞均來(lái)自一個(gè)受精卵細(xì)胞。所以,通常把發(fā)育過(guò)程中,細(xì)胞后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過(guò)程稱為細(xì)胞分化。細(xì)胞分化發(fā)生在胚胎階段,也發(fā)生在胎兒出生以后,乃至成人階段。例如,人體血細(xì)胞的產(chǎn)生和分化,這個(gè)過(guò)程在人的一生中一直持續(xù)著。由旺盛生長(zhǎng)不斷分裂的細(xì)胞,轉(zhuǎn)入分化,通常從細(xì)胞周期中G1期開始時(shí)一個(gè)確定的點(diǎn)G0點(diǎn)“逃逸”出細(xì)胞周期。旺盛生長(zhǎng)分裂的細(xì)胞和各種分化了的細(xì)胞,它們的基因表達(dá)和代謝活動(dòng)各不相同。 細(xì)胞傳代方法:每周換液2次。 ME1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE9細(xì)胞、Tb 1 Lu (NBL-12)細(xì)胞、NCI-H2228細(xì)胞 Pt K2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mouse podocyte細(xì)胞、MHCC 97-H細(xì)胞、KM12細(xì)胞 SUP-B15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NK-92.05細(xì)胞、PC-3M 2B4細(xì)胞、Hs 742.T細(xì)胞 ARH 77細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:UMUC-14細(xì)胞、MDA-453細(xì)胞、HET1A細(xì)胞 J-111細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero 76 clone E6細(xì)胞、LAD2細(xì)胞、HT-22細(xì)胞 細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明:細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系 NCI-H1876 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 細(xì)胞生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng) 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮細(xì)胞樣 為什么培養(yǎng)的細(xì)胞要及時(shí)傳代?體外培養(yǎng)的細(xì)胞大多具有生長(zhǎng)接觸抑制的特性,也就是說(shuō)當(dāng)一個(gè)細(xì)胞被其他細(xì)胞包圍的時(shí)候,它就會(huì)停止生長(zhǎng),及時(shí)傳代后,細(xì)胞的生長(zhǎng)得以繼續(xù)。培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些?可能的原因有:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷眈肢或生長(zhǎng)因子等耗盡或缺乏或己被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清等,找出其它可能的原因。解決辦法:增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度;讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補(bǔ)加谷酷肢或生長(zhǎng)因子等;用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,去棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在5℃到20℃; 培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。冷凍管應(yīng)如何解凍?取出冷凍管后,須立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1-2分鐘內(nèi)大部分融化,特別注意,需殘留一小塊冰塊,就可拿到超凈工作臺(tái)操作細(xì)胞,用75%酒精消毒凍存管,用新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),必須注意安全,預(yù)防冷凍管爆裂。 H-498細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NHRF細(xì)胞、SNU368細(xì)胞、COLO 320 DM細(xì)胞 Hep G2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKLU1細(xì)胞、NCI-H187細(xì)胞、C8166-CD4細(xì)胞 SK MEL 28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Fetal Human Colon細(xì)胞、NP69細(xì)胞、HREC細(xì)胞 CF Pac1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:bEND.3細(xì)胞、32D-Cl3細(xì)胞、HCC-1588細(xì)胞 H-1993細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc02細(xì)胞、Wistar Institute, Susan Hayflick細(xì)胞、293A細(xì)胞 NCIH1385細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P 815細(xì)胞、NCI H345細(xì)胞、Kobe university Oral Squamous Cell culture-2細(xì)胞 WiDr-TC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Los Angeles Prostate Cancer-4細(xì)胞、SUM-190PT細(xì)胞、WIL2 Secreting細(xì)胞 HMEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BE(2)-M17細(xì)胞、SKGT4細(xì)胞、QGP 1細(xì)胞 H-747細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPC-Y5細(xì)胞、H727細(xì)胞、VMRC-LCD細(xì)胞 DoTc2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 688(A).T細(xì)胞、FU-OV-1細(xì)胞、MV4:11細(xì)胞 NCI-H1876 epithelioid cells人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 SF-126細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HGSMC細(xì)胞、OCIAML2細(xì)胞、Lu-99A細(xì)胞 MKN45細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-671細(xì)胞、MCMEC細(xì)胞、SVG(P12)細(xì)胞 RAG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFTF細(xì)胞、OSRC2細(xì)胞、CD18細(xì)胞 Hs940-T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2228細(xì)胞、SNU-886細(xì)胞、DMS 79細(xì)胞 AE1201細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 357細(xì)胞、WM-266-mel細(xì)胞、MM1S細(xì)胞 Epstein-Barr-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HK2細(xì)胞、MLTC-1細(xì)胞、SKMES細(xì)胞 Epstein-Barr-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HK2細(xì)胞、MLTC-1細(xì)胞、SKMES細(xì)胞 MA104細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ONS-76細(xì)胞、MOLM16細(xì)胞、HSC1細(xì)胞 B-95-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-cell細(xì)胞、CAMA細(xì)胞、KTC-1細(xì)胞 SMMC7721細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CTLA4Ig-24細(xì)胞、C-6細(xì)胞、GM07404細(xì)胞 H446細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUIT 2細(xì)胞、OV-CA 432細(xì)胞、SF 767細(xì)胞 MC3T3-E1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2228細(xì)胞、RAW-264.7細(xì)胞、Hs 729T細(xì)胞 QG-56細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SY5Y細(xì)胞、Tu-686細(xì)胞、SB細(xì)胞 CHP 100細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PANC3.27細(xì)胞、RWPE-1細(xì)胞、Hs-611-T細(xì)胞 HCAEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH522細(xì)胞、H.Ep.-2細(xì)胞、PLC細(xì)胞 MESSA-DX5細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GLC-15細(xì)胞、PLA801D細(xì)胞、OCI-AML2細(xì)胞 rHSC-99細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:624細(xì)胞、Onda 11細(xì)胞、Panc327細(xì)胞 NCIH889細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS180細(xì)胞、SK-HEP-1細(xì)胞、FHL 124細(xì)胞 OCI/AML-3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDST8細(xì)胞、293FT細(xì)胞、He La細(xì)胞 H647ell細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SMMC-7721細(xì)胞、C3H10T1/2細(xì)胞、OCIAML4細(xì)胞 LLC-MK-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-9細(xì)胞、SN12CPM6細(xì)胞、NCI-H1734細(xì)胞 GM05862細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1404細(xì)胞、Hs695T細(xì)胞、OVCA-433細(xì)胞 rUCMSCs細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK.EBNA細(xì)胞、SB細(xì)胞、ME16C細(xì)胞 Hs 675.T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PanC1細(xì)胞、KYSE-270細(xì)胞、NHEK細(xì)胞 COLO-824細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Med 341細(xì)胞、Rat Skin 1細(xì)胞、M1細(xì)胞 HT-1080細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AMJ2C8細(xì)胞、Capan-2細(xì)胞、U266細(xì)胞 SNK6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BJA-B1細(xì)胞、H69C細(xì)胞、CCC-HPF-1細(xì)胞 UPCI:SCC154細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PTK1細(xì)胞、Lu99A細(xì)胞、HSC3細(xì)胞 SKM1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:QBC-939細(xì)胞、KBM-5細(xì)胞、NCIH647細(xì)胞 KYSE520細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE-85細(xì)胞、Lewis lung carcinoma細(xì)胞、LC-2 ad細(xì)胞 NCI-SNU-16細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IHH細(xì)胞、NTERA-2細(xì)胞、T98細(xì)胞 MDCK-II細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-Lu-65細(xì)胞、MN-60細(xì)胞、HCC94細(xì)胞 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