"CAL-27 epithelioid cells人舌鱗狀上皮細胞癌細胞系 細胞背景資料:該細胞1982年由J. Gioanni建系,源自一位56歲白人男性的舌頭中倍的病變部位,角蛋白強陽性 細胞形態(tài):上皮細胞樣 正確的細胞復(fù)蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標(biāo)記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當(dāng)從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 RIN-m5F細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIN87細胞、CCC-HHM-2細胞、639V細胞 HCT 116細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1694細胞、MOLT-16細胞、Metastatic Variant-522細胞 H711細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IMCD-3細胞、SW 982細胞、MGHU3細胞 細胞生長:貼壁 CAL-27 epithelioid cells人舌鱗狀上皮細胞癌細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 最近在培養(yǎng)細胞時,發(fā)現(xiàn)其狀態(tài)不是很好,很容易扎堆生長,用胰酶消化的時候也是一團一團地被消化下來,很難把它們吹散成一個一個細胞。而且長得也挺快也挺不均勻的,傳代的第二天,有些地方就長得滿滿的了。想請教一下這是為什么呢?你好,我養(yǎng)的細胞和你一樣,消化下來也是一團的,但吹打以后就沒有這樣的情況了。建議你分皿前還是要吹勻,分皿后在鏡下看一看,移動培養(yǎng)皿的時候盡量動作輕,避免晃動。細胞生長挺快,那么細胞的增殖能力應(yīng)該較強。胰酶消化成團的問題我覺得有以下幾種可能:一、細胞消化后吹打不均勻,造成細胞成團生長:二、細胞細化太過,細胞成片脫落,吹打時沒有受力點,細胞聚團生長。解決辦法:根據(jù)細胞生長的情況進行多次消化,將同次消化下來的細胞放在一個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。貼壁細胞傳代培養(yǎng):一般步驟為:真空泵吸走培養(yǎng)基,1XPBS漂洗兩次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿為例),37度放置數(shù)分鐘,輕拍培養(yǎng)瓶使細胞自瓶壁脫落,加入適量血清,以吸管上下吸放數(shù)次以打散細胞團塊,離心后加入新鮮培養(yǎng)基,按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間,若胰酶處理太久,容易造成細胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強,嚴重的時候甚至?xí)斐杉毎劳?。我談?wù)剛€人經(jīng)驗:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細胞處理時間可適當(dāng)放長,一般處理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落,2min足矣,P19Cl6和293細胞貼壁不緊,可在PBS漂洗后,直接換新鮮培養(yǎng)基打散。 細胞傳代方法:1:6傳代,2—3天換液一次 PANC-28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHAGOK1細胞、NCI-H510A細胞、H-EMC-SS細胞 NCI-H2291細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1299細胞、OCI-LY-19細胞、H1435細胞 Mouse Podocyte Clone-5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DSL-6A/C1細胞、HCEC-12細胞、U-251細胞 PK-136細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1876細胞、NCI-H295細胞、DHL-8細胞 CALU 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM00637I細胞、NCI H226細胞、Hs 695.T細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 CAL-27 epithelioid cells人舌鱗狀上皮細胞癌細胞系 細胞生長特性:貼壁生長 細胞形態(tài)特性:上皮細胞樣 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導(dǎo)致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復(fù)蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 NB.4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FHL 124細胞、OV-90細胞、FDCP1細胞 M-1 myeloid leukemia細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI H69細胞、H69/P細胞、RAT2細胞 MNNG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:I90細胞、Clone 929細胞、SW 839細胞 CFSC-8B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-6 myoblast細胞、HCAEC細胞、M20 [Human melanoma]細胞 MFE 280細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C57 Mouse Tumor 64細胞、SK ES 01細胞、HCC-1833細胞 Ly3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H295R細胞、MDA-MB-330細胞、LLC-WRC 256細胞 H-2107細胞系相關(guān)產(chǎn)品:rUCMSCs細胞、HDQP1細胞、H-1688細胞 LS-174細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OLN-93細胞、NCI-H1703細胞、HCC-2279細胞 Evsa-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC-9S1細胞、C42細胞、NCI-H1703細胞 NUGC-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-735細胞、MOLT 16細胞、HTR-8/SV neo細胞 CAL-27 epithelioid cells人舌鱗狀上皮細胞癌細胞系 HUCCT1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-343-T細胞、MT-3 [Human leukocytes]細胞、Bx-PC3細胞 Hs 683細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RDES細胞、Hs606細胞、HuH-6細胞 H1650細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2171細胞、PLB-985細胞、HCCLM6細胞 CA-46細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B-95-8細胞、Daoy細胞、9L細胞 Hx-147細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PLB 985細胞、MES-23.5細胞、PG-4細胞 mousepodocyte細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HH [Human lymphoma]細胞、Menschliche Und Tierische Zellkulture-3細胞、MCA-38細胞 mousepodocyte細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HH [Human lymphoma]細胞、Menschliche Und Tierische Zellkulture-3細胞、MCA-38細胞 Super Tube細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCCVII/St細胞、COR-L23/P細胞、TE5細胞 NCIH23細胞系相關(guān)產(chǎn)品:mIMCD-3細胞、SUPM2細胞、U-118-MG細胞 BC-021細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Highly Aggressively Proliferating Immortalized細胞、BRL細胞、MDA-MB 453細胞 FAT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Dunn LM8細胞、IPLB-SF 21AE細胞、H1650_CO細胞 PC-9/GR細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC 61-5-3細胞、NCI-H2172細胞、MDA MB 134VI細胞 Fox/NY細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ZR751細胞、HCS-2/8細胞、SNB-19細胞 HPAEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vero細胞、FBHE細胞、SK-SH-SY5Y細胞 CW-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2066細胞、C-4 I細胞、Rat Chondrosarcoma Swarm細胞 NCI-H446細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM 451-Lu細胞、TALL1細胞、H-226細胞 RCM-1 [Human rectum adenocarcinoma]細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPDE細胞、TOV-21G細胞、H-2107細胞 HPDLF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC2935細胞、MLO-Y4細胞、J774 A.1細胞 no-11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MiaPaca.2細胞、KMB-17細胞、HRIF細胞 Hs 822.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-MC細胞、CV 1細胞、GCT0404細胞 WERIRb1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Clone 15 HL-60細胞、HCC0070細胞、Ly18細胞 KYSE-510細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR432細胞、KE37細胞、B78細胞 C32 mel細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MESSA-DX5細胞、C1R細胞、NGEC細胞 CORL26細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-239A細胞、KMS11細胞、MDAPC2B細胞 RIN14B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CFSC-8B細胞、SCC-15細胞、LC-1-sq細胞 SUM-190PT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-N-F1細胞、Calu-1細胞、CWR22-R1細胞 B16 melanoma F10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH69細胞、OKT3細胞、EFO-27細胞 C1R細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK-293細胞、UMNSAH-DF1細胞、NOR 10細胞 JROECL 19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BI-Mel細胞、KRC Y細胞、HBSMC細胞 H-2170細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WILL-2細胞、Y-79細胞、RN-c細胞 HMCB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Madin-Darby Bovine Kidney細胞、MDCKII-WT細胞、NPC-TW 01細胞 CAL-62細胞系相關(guān)產(chǎn)品:mRMEC細胞、KYSE180細胞、HS766T細胞 P3-X63-Ag8-6-5-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JJN-3細胞、CT26細胞、HEK293-EBNA1細胞 Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NFHIOSE-29細胞、A 2058細胞、H-2347細胞 N87細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HDSMC細胞、Th17細胞、L-M(TK-)細胞 WPMY-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:8226細胞、K7M2-WT細胞、VM Cub 1細胞 TE 32.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF 767細胞、WEHI-3B細胞、C1498細胞 NCIH1618細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CFSC-2G細胞、LAN1細胞、KP-N-YN細胞 P3-X63-Ag8-6-5-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JJN-3細胞、CT26細胞、HEK293-EBNA1細胞 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