"MCF-7 Cell:人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:貼壁 細(xì)胞背景資料:MCF-7細(xì)胞保留了多個(gè)分化了的乳腺上皮的特性,包括:能通過胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成圓形復(fù)合物(domes)。該細(xì)胞含有Tx-4癌基因。腫瘤壞死因子α(TNFalpha)可以抑制MCF-7細(xì)胞的生長。抗雌激素處理細(xì)胞能調(diào)變IGFBP'S的分泌。 DOK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM12878細(xì)胞、Nthy ori 3.1細(xì)胞、NB-19細(xì)胞 NCIH295R細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TI-73細(xì)胞、NCIH1755細(xì)胞、NCI-H2591細(xì)胞 H-157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:U266 B1細(xì)胞、NCI-H1876細(xì)胞、Panc10.05細(xì)胞 COLO679細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:EPC細(xì)胞、Hs-940細(xì)胞、SCH細(xì)胞 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 MCF-7 Cell:人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞凍存基本方法:1.細(xì)胞:選對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時(shí)前換液一次。2.計(jì)數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),令細(xì)胞密度達(dá)5×10(6)/ml,離心去上清,吸入離心管中。3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。5.封口:用塑料安剖時(shí)擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細(xì)檢查,定要封嚴(yán),必要時(shí)可浸入藍(lán)色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時(shí)因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細(xì)胞名稱,凍存日期,以便日后查找。細(xì)胞株(系)的使用,為醫(yī)學(xué)研究和測(cè)試工作帶來了極大的方便。但細(xì)胞的傳代是有限制的,長期連續(xù)傳代的細(xì)胞,不僅消耗大量的人力和物力,而且細(xì)胞的生長與形態(tài)等會(huì)有一定退變或轉(zhuǎn)化,因而細(xì)胞失去原有的遺傳特性,有時(shí)還會(huì)由于細(xì)胞污染而造成傳代中斷,種子丟失。因此,在實(shí)際工作中常需凍存一定數(shù)量的細(xì)胞,以備替換使用。細(xì)胞冷凍與復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng) 室的常規(guī)工作和通用技術(shù)。 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:1:2傳代,3-4天長滿 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常見問題總結(jié):1)一般客戶拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?客戶收到細(xì)胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各一張),排除細(xì)胞本身污染的情況;收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。細(xì)胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細(xì)胞多久能到,是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細(xì)胞前請(qǐng)確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟龋绻麣鉁氐陀冢炊鹊?,則采用郵寄凍存細(xì)胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無法存活。 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 D324細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IMR32細(xì)胞、NCI-H211細(xì)胞、RMC-1細(xì)胞 Uhth-74細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOS (TE85, Clone F5)細(xì)胞、P30-OHK細(xì)胞、OSKM-1細(xì)胞 NG-108-15細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TC-1 [Mouse lung]細(xì)胞、CL11細(xì)胞、BNL CL.2細(xì)胞 HEK 293FT細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CBRH7919細(xì)胞、HBE細(xì)胞、IAR 20細(xì)胞 NCIH292細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS 683T細(xì)胞、Beta-TC-6細(xì)胞、BRL細(xì)胞 細(xì)胞生長特性:貼壁生長 MCF-7 Cell:人乳腺癌細(xì)胞系 細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的問題分析:總結(jié)1:復(fù)蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當(dāng)然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細(xì)胞沒問題??偨Y(jié)2:首先應(yīng)該懷疑凍存,實(shí)際上復(fù)蘇出問題的可能非常小,因?yàn)椴僮骱唵危宜腊?。1、你凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個(gè)問題,太長的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會(huì)死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻,這個(gè)有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格,很多人容易忘卻這個(gè)事情,因?yàn)檫@個(gè)東西流程長。6、如果你細(xì)胞污染,你是否能很快看到,我比我的導(dǎo)師能早一天看到污染。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。7、你的細(xì)胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個(gè)概念的,所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話,這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因?yàn)榉跸錈o論你如何處理都有大量的細(xì)菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個(gè)很重要,不能靠猜,否則你就有可能細(xì)胞養(yǎng)絕最后換課題,這個(gè)見得太多了,別不當(dāng)會(huì)事。 細(xì)胞形態(tài)特性:上皮樣 Hca-F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ARO81細(xì)胞、RASMCs細(xì)胞、SK Mel 2細(xì)胞 Buffalo Rat Liver-3A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VMRCLCD細(xì)胞、Hs940.T細(xì)胞、Verda reno細(xì)胞 H-4-II-E細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:8505C細(xì)胞、SNUC2A細(xì)胞、U-373-MG細(xì)胞 EL-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NHDF細(xì)胞、16HBE14o-細(xì)胞、MHCC-97細(xì)胞 SW780細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:TOV-21G細(xì)胞、EB3 [Human Burkitt lymphoma]細(xì)胞、Vero E6細(xì)胞 BEAS2B細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:JOSK-M細(xì)胞、MCA 38細(xì)胞、WM-239-A細(xì)胞 THP1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HBVP細(xì)胞、WM115-mel細(xì)胞、MUTZ3細(xì)胞 MCF-7 Cell:人乳腺癌細(xì)胞系 OV 2008細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FOXNY細(xì)胞、HFF-1細(xì)胞、NCI-H78細(xì)胞 L細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PMVEC細(xì)胞、DU-4475細(xì)胞、NCI-SNU-668細(xì)胞 TCC Sup細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 695.T細(xì)胞、OCI-Ly01細(xì)胞、OCILY10細(xì)胞 SLK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-52-PE細(xì)胞、SK_N_BE2C細(xì)胞、CAMA細(xì)胞 H-1944細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNB.19細(xì)胞、H-35細(xì)胞、Rat 2細(xì)胞 MFC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC3T3-L1細(xì)胞、C-Li-7細(xì)胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-2細(xì)胞 B10BR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H838細(xì)胞、OVCA5細(xì)胞、IPEC-1細(xì)胞 D6P2T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFL1細(xì)胞、SAS細(xì)胞、Hs 675.T細(xì)胞 UMRC-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBL細(xì)胞、NCI-H740細(xì)胞、CMT-93細(xì)胞 UMRC-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:RBL細(xì)胞、NCI-H740細(xì)胞、CMT-93細(xì)胞 SKNFI細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma細(xì)胞、NCI-H1155細(xì)胞、WBF344細(xì)胞 MOLM13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL 85-1細(xì)胞、HCC-1954BL細(xì)胞、Hep-3B細(xì)胞 COLO320/DM細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pro-Lec1.3C細(xì)胞、Jurkat-FHCRC細(xì)胞、GOTO細(xì)胞 Tca-8113細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KM12細(xì)胞、Hca-F細(xì)胞、NP-69細(xì)胞 Renal Carcinoma細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LNCaP subline C4-2細(xì)胞、H9c2細(xì)胞、Hs 888.T細(xì)胞 Hs888T細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C4 I細(xì)胞、LPC-H12細(xì)胞、GOS3細(xì)胞 U251n細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:IM-9細(xì)胞、NCIH748細(xì)胞、H-1672細(xì)胞 H841細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16 F1細(xì)胞、MonoMac1細(xì)胞、TE-671細(xì)胞 JG細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC9細(xì)胞、High5細(xì)胞、MFE-296細(xì)胞 HUT 125細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LTEP a2細(xì)胞、TPC1細(xì)胞、SW260細(xì)胞 MDA-MB157細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:hUC-MSC細(xì)胞、CZ-1細(xì)胞、SUM-102細(xì)胞 SLMT1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:L 428細(xì)胞、SK-N-F1細(xì)胞、HEC-1-B細(xì)胞 SNUC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSC3細(xì)胞、PY8119細(xì)胞、AML-EOL-1細(xì)胞 Panc-03.27細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 320F細(xì)胞、NKT細(xì)胞、B16-BL6細(xì)胞 CCD841CoTr細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A-72細(xì)胞、MFM223細(xì)胞、U-343細(xì)胞 38C-13細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MAVER細(xì)胞、HT-3細(xì)胞、U343細(xì)胞 no.11細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCE-2 [50.B1]細(xì)胞、THC-8307細(xì)胞、HCA-7細(xì)胞 KNS81細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3-J2細(xì)胞、LS-513細(xì)胞、LUDLU 1細(xì)胞 ECC-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3 Swiss Albino細(xì)胞、Neuro2a細(xì)胞、H2126細(xì)胞 SMA 560細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF-II細(xì)胞、H2444細(xì)胞、I90細(xì)胞 MDA435細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NUGC-3細(xì)胞、MFE280細(xì)胞、JEG3細(xì)胞 P3X63 AG 8.653細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C33細(xì)胞、P-2003細(xì)胞、PANC-10-05細(xì)胞 MC/9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A7r5細(xì)胞、H-1355細(xì)胞、CMEC/D3細(xì)胞 Biologics Standards-Cercopithecus-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-810細(xì)胞、KAT-5細(xì)胞、MB39細(xì)胞 COLO 201細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Madin Darby Canine Kidney細(xì)胞、HuP-T3細(xì)胞、Bovine Turbinate細(xì)胞 SNU475細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH661細(xì)胞、BEL7402細(xì)胞、SJRH30細(xì)胞 LTEP-a2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:S37細(xì)胞、Intestinal Porcine Epithelial Cell line-1細(xì)胞、WRL68細(xì)胞 CCD 841 CoTr細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-320HSR細(xì)胞、CHP212細(xì)胞、C3H-10T1/2細(xì)胞 NUGC3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:VMRC-RCZ細(xì)胞、SU-DHL6細(xì)胞、16-HBEo細(xì)胞 SNUC2A細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A 549細(xì)胞、Panc_02_03細(xì)胞、Michigan Cancer Foundation-12A細(xì)胞 HuTu 80細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT483細(xì)胞、MPC-83細(xì)胞、Nakata-1細(xì)胞 WBF344細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCC1428細(xì)胞、TF-1細(xì)胞、WRL 68細(xì)胞 NPA87-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM 52PE細(xì)胞、Y3細(xì)胞、HT 1376細(xì)胞 MCF-7 Cell:人乳腺癌細(xì)胞系 Hep II細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1581細(xì)胞、Anglne細(xì)胞、MHCCLM3細(xì)胞 ES2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI AML5細(xì)胞、ChaGo-K1細(xì)胞、32D/cl3細(xì)胞 RT-112細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:C32-mel細(xì)胞、HeLa/DDP細(xì)胞、RCC10細(xì)胞 Sf-21細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:KAT5細(xì)胞、MiaPaca.2細(xì)胞、PC10細(xì)胞 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