"MDA-MB-453 Cell:人乳腺癌細胞系 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞背景資料:該細胞系由CailleauR在1976年從一名48歲的患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的白人女性的心包滲出液中分離建立的。該細胞表達FGF的受體。 EFM192B細胞系相關產(chǎn)品:COLO-394細胞、NCI-H2227細胞、Helacyton gartleri細胞 U-251細胞系相關產(chǎn)品:Hs 606細胞、293E細胞、CT26-clone 25細胞 Colon 26細胞系相關產(chǎn)品:Jiyoye (P-2003)細胞、Ramos細胞、MHCC97細胞 A549ATCC細胞系相關產(chǎn)品:H-1435細胞、SJCRH30細胞、RGB細胞 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 MDA-MB-453 Cell:人乳腺癌細胞系 如何把細胞養(yǎng)的形態(tài)更好更漂亮。1.不同的細胞,喜歡的環(huán)境是不一樣的。這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同,還有就是細胞生長的空間密度問題。有一些細胞是數(shù)量多一點比較好生長,生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內(nèi)皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好,譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應該留很少量的細胞,這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細胞形態(tài)基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。2.對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞,如果細胞形態(tài)不好,(或者細胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進行預吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細胞我們只吹打,不消化的);其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi),培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。呵呵。如果一次效果還不理想,可重復多次。直到找到細胞完美形態(tài)。其中要注意,結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。3.關于培養(yǎng)瓶內(nèi)加入培養(yǎng)基的量的問題。這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。(可能也是競爭很大,有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。)對于生長速度快的細胞,易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。4.關于選擇培養(yǎng)瓶的問題。個人發(fā)現(xiàn)生長速度快的細胞在玻璃瓶內(nèi)生長的狀態(tài)會比一次性相對好一些。而對于同一種細胞,在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內(nèi)的生長狀態(tài)也比內(nèi)好。這可能是因為比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細胞在這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對于生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài),比玻璃瓶會好,對于生長速度慢的細胞,玻璃瓶則會更好。同樣,對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候,會好一點,比如剛剛復蘇的時候,或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候,玻璃瓶則相對會好一點。 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2-1:4傳代;2-3天換液1次 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結:1)一般客戶拿到細胞后,應該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 CV-1細胞系相關產(chǎn)品:CCD 1112SK細胞、HCPEpiC細胞、WiDrTC細胞 SN12-PM6細胞系相關產(chǎn)品:Panc08.13細胞、CNE-1細胞、108CC15細胞 SKML-28細胞系相關產(chǎn)品:CT26.CL25細胞、TE32細胞、PG13細胞 TALL1細胞系相關產(chǎn)品:VERO76細胞、293-H細胞、SHZ-88細胞 MLTC-1細胞系相關產(chǎn)品:MV3細胞、HemECs細胞、SK N SH細胞 細胞生長特性:貼壁生長 MDA-MB-453 Cell:人乳腺癌細胞系 細胞復蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結1:復蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y2:首先應該懷疑凍存,實際上復蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當會事。 細胞形態(tài)特性:上皮樣;多角形 P3X63Ag8細胞系相關產(chǎn)品:HEK293A細胞、SCC-7細胞、SNU407細胞 HM1900細胞系相關產(chǎn)品:Hs 636.T細胞、RFL6細胞、Immortal Pig Intestinal-2I細胞 Wayne State University-Head and Neck 13細胞系相關產(chǎn)品:NU-GC-4細胞、ND7/23細胞、H1792細胞 J82 COT細胞系相關產(chǎn)品:TE-1細胞、Namalva細胞、NCIH196細胞 SK LU 1細胞系相關產(chǎn)品:EMT6細胞、LA-N-6(OAN)細胞、NCIH1836細胞 MOPC細胞系相關產(chǎn)品:HS-294細胞、GM3570細胞、C57 Mouse Tumor 64細胞 TC-1 [Mouse lung]細胞系相關產(chǎn)品:Hs 274細胞、HuH-28細胞、NCIH2023細胞 MDA-MB-453 Cell:人乳腺癌細胞系 SUD4細胞系相關產(chǎn)品:HNTEC細胞、T HEECs細胞、Hs688(A)T細胞 SK UT 1細胞系相關產(chǎn)品:SNU216細胞、HD11細胞、MN60細胞 HEK-293-EBNA細胞系相關產(chǎn)品:32Dcl3細胞、Bac 1.2F5細胞、BALB/3T3 clone A31細胞 PIG3細胞系相關產(chǎn)品:HT 29細胞、786-O RCC細胞、JURKAT E-61細胞 SW626細胞系相關產(chǎn)品:XWLC-05細胞、VMRC-LCD細胞、HCV29細胞 CMT-64細胞系相關產(chǎn)品:GP2d細胞、tdott細胞、UMNSAH-DF1細胞 SK-N-BE2C細胞系相關產(chǎn)品:MDA-MB468細胞、TE 32.T細胞、OVCAR-432細胞 SW839細胞系相關產(chǎn)品:RC-2細胞、Kit 225 K6細胞、SNU182細胞 MKN1細胞系相關產(chǎn)品:MDCK2細胞、KLN-205細胞、Ly3細胞 MKN1細胞系相關產(chǎn)品:MDCK2細胞、KLN-205細胞、Ly3細胞 MT-3 [Human leukocytes]細胞系相關產(chǎn)品:PAMC82細胞、Hs 729T細胞、RPMI 8226/S細胞 Laboratory of Allergic Diseases 2細胞系相關產(chǎn)品:SU-DHL-1細胞、Hep 3B2_1-7細胞、GM-215細胞 McA-RH 8994細胞系相關產(chǎn)品:A-375細胞、Baby Hamster Kidney-21細胞、SCL II細胞 SCC VII細胞系相關產(chǎn)品:AN3-CA細胞、Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2細胞、MFE296細胞 526mel細胞系相關產(chǎn)品:MC3T3-E1(C4)細胞、RPMI7951細胞、HD11細胞 MXI細胞系相關產(chǎn)品:Earles's cells細胞、HET-1A細胞、HepG2-luc細胞 DU-145細胞系相關產(chǎn)品:HRGEC細胞、Human Pancreatic Duct Epithelial細胞、Hx-147細胞 EBNA-293細胞系相關產(chǎn)品:SKNBE(1)細胞、QBC(939)細胞、GP5d細胞 Centre Antoine Lacassagne-33細胞系相關產(chǎn)品:Det. 562細胞、MV522細胞、MAC1細胞 Hepatoma-22細胞系相關產(chǎn)品:NCI.H522細胞、Colo320細胞、B-104細胞 BAC1.2F5細胞系相關產(chǎn)品:LAD-2細胞、HBVP細胞、VB細胞 SR786細胞系相關產(chǎn)品:NOR-10細胞、NCIH1944細胞、639-V細胞 Opossum Kidney細胞系相關產(chǎn)品:SK RC 52細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1細胞、NHA細胞 A-673細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H2085細胞、Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3細胞、KG-1a細胞 Hs 766.T細胞系相關產(chǎn)品:NCIH838細胞、HPMC細胞、HT 1376.T細胞 MM96L細胞系相關產(chǎn)品:SF-767細胞、DoHH2細胞、IEC18細胞 HT-3細胞系相關產(chǎn)品:TE353.SK細胞、SK-N-BE2細胞、WM-239細胞 NCIH208細胞系相關產(chǎn)品:L6565細胞、Murine Long bone Osteocyte-Y4細胞、M-G63細胞 MC3T3E1細胞系相關產(chǎn)品:Panc10.05細胞、RH7777細胞、UT7細胞 Sp2/mIL-6細胞系相關產(chǎn)品:MDAPCa2b細胞、WM239A細胞、UCLA RO-81-A-1細胞 K1細胞系相關產(chǎn)品:McCoy B細胞、PLA-802細胞、PNEC30細胞 PL5細胞系相關產(chǎn)品:PSN-1細胞、JM-Jurkat細胞、SK-N-FI細胞 LMH細胞系相關產(chǎn)品:SAOS 2細胞、Madin-Darby Canine Kidney細胞、NCI-H920細胞 KYSE140細胞系相關產(chǎn)品:H1573細胞、BJ1細胞、H1299細胞 TE5細胞系相關產(chǎn)品:MN-9D細胞、NCI-H2066細胞、TE-5細胞 Hs 737.T細胞系相關產(chǎn)品:293 F細胞、BT細胞、Merwin Plasma Cell tumor-11細胞 RGM1細胞系相關產(chǎn)品:C1R細胞、HT-29細胞、SKMel-28細胞 BALB/c 3T3 clone A31細胞系相關產(chǎn)品:SVHUC細胞、SUM-159細胞、H-1573細胞 Hs683細胞系相關產(chǎn)品:293-F細胞、LK 2細胞、Line 697細胞 RPE1細胞系相關產(chǎn)品:WM 266-4細胞、H-2195細胞、CCD-112 CoN細胞 RPE1細胞系相關產(chǎn)品:WM 266-4細胞、H-2195細胞、CCD-112 CoN細胞 MGH-UI細胞系相關產(chǎn)品:ASH3細胞、Bovine Turbinate細胞、SK-MEL3細胞 Statens Seruminstitut Rabbit Cornea細胞系相關產(chǎn)品:SUDHL4細胞、HT細胞、HCEC-B4G12細胞 MDA-MB-453 Cell:人乳腺癌細胞系 SK-N-BE細胞系相關產(chǎn)品:ROS 17/2.8細胞、CCD841CoN細胞、KYSE-410細胞 D-283MED細胞系相關產(chǎn)品:293 Ad5細胞、KMS-18細胞、P3-NS1/1-Ag4-1細胞 GBCSD細胞系相關產(chǎn)品:Vx2細胞、IGROV細胞、Hs 274.T細胞 H322細胞系相關產(chǎn)品:P3-x63-Ag8 653細胞、Jiyoye細胞、293F細胞 MODE-K細胞系相關產(chǎn)品:RC-4B細胞、GM03190A細胞、H-69細胞 Hs 832(C).T細胞系相關產(chǎn)品:H-2085細胞、NW38細胞、HCC-202細胞 870細胞系相關產(chǎn)品:H1650細胞、BTI-Tn5B14細胞、EFO 27細胞 RPPVEC細胞系相關產(chǎn)品:H209細胞、HCT FET細胞、UACC893細胞 Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8細胞系相關產(chǎn)品:AGS細胞、P388.D1細胞、P3X63 AG8-653細胞 U-2932細胞系相關產(chǎn)品:Hs 839.T細胞、P3HR1細胞、NRK52E細胞 H441細胞系相關產(chǎn)品:HHL5細胞、H748細胞、MNNG/HOS Clone F-5細胞 P3/NS-1細胞系相關產(chǎn)品:3LL細胞、SU-DHL-5細胞、RT-BM 1細胞 "
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