"SNU-423 Cell:人肝癌細胞系 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞背景資料:詳見相關文獻介紹 SF539細胞系相關產(chǎn)品:K562細胞、SJ-Rh 30細胞、3T3NIH細胞 TC7細胞系相關產(chǎn)品:KMBC細胞、LC2/Ad細胞、A-72細胞 A2780細胞系相關產(chǎn)品:RMG1細胞、Sf21細胞、CCD 841 CoTr細胞 PC10細胞系相關產(chǎn)品:MIMVEC細胞、BNCL2細胞、NCI-H2106細胞 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 SNU-423 Cell:人肝癌細胞系 如何把細胞養(yǎng)的形態(tài)更好更漂亮。1.不同的細胞,喜歡的環(huán)境是不一樣的。這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同,還有就是細胞生長的空間密度問題。有一些細胞是數(shù)量多一點比較好生長,生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內(nèi)皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好,譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應該留很少量的細胞,這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細胞形態(tài)基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。2.對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞,如果細胞形態(tài)不好,(或者細胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進行預吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細胞我們只吹打,不消化的);其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi),培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。呵呵。如果一次效果還不理想,可重復多次。直到找到細胞完美形態(tài)。其中要注意,結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。3.關于培養(yǎng)瓶內(nèi)加入培養(yǎng)基的量的問題。這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。(可能也是競爭很大,有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。)對于生長速度快的細胞,易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。4.關于選擇培養(yǎng)瓶的問題。個人發(fā)現(xiàn)生長速度快的細胞在玻璃瓶內(nèi)生長的狀態(tài)會比一次性相對好一些。而對于同一種細胞,在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內(nèi)的生長狀態(tài)也比內(nèi)好。這可能是因為比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細胞在這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對于生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài),比玻璃瓶會好,對于生長速度慢的細胞,玻璃瓶則會更好。同樣,對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候,會好一點,比如剛剛復蘇的時候,或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候,玻璃瓶則相對會好一點。 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2傳代 細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結:1)一般客戶拿到細胞后,應該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復蘇好的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當?shù)販囟?,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 MIMVEC細胞系相關產(chǎn)品:A2780細胞、CCLP1細胞、SW-780細胞 CTX TNA2細胞系相關產(chǎn)品:JB-6 Cl 30細胞、USMC細胞、C-32細胞 NPA-87細胞系相關產(chǎn)品:RC92A細胞、H-4細胞、SUPT-1細胞 Astrocyte type I clone細胞系相關產(chǎn)品:NCI-SNU-1細胞、H2.35細胞、SHI1細胞 MRC-V細胞系相關產(chǎn)品:Human Pancreatic Duct Epithelial細胞、HSC 3細胞、HO8910細胞 細胞生長特性:貼壁生長 SNU-423 Cell:人肝癌細胞系 細胞復蘇后貼壁細胞較少的問題分析:總結1:復蘇過程沒有問題,是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,二氧化碳濃度,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,看看能否幫助貼壁,當然也需要考慮血清問題,還有確信拿來的細胞沒問題??偨Y2:首先應該懷疑凍存,實際上復蘇出問題的可能非常小,因為操作簡單,而且死板。1、你凍存的時候是不是消化的時間過長,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力,表現(xiàn)為先貼后死,原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉(zhuǎn)的死亡。2、你的凍存液好不好,是什么,甘油還是DMSO,質(zhì)量非常重要,否則也會死亡。3、你的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,大于5%,太多也不好。4、你在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,這個有一些影響,但不算太大。5、你的凍存是否按部就班,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,因為這個東西流程長。6、如果你細胞污染,你是否能很快看到,我比我的導師能早一天看到污染。從這個角度講建議去除離心這步。7、你的細胞在凍存前是否過密。還有,不贊成孵箱污染這個概念的,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,但這不代表孵箱污染,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作。每次污染的原因都要盡可能的找,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,不能靠猜,否則你就有可能細胞養(yǎng)絕最后換課題,這個見得太多了,別不當會事。 細胞形態(tài)特性:上皮樣 MG-63細胞系相關產(chǎn)品:TEV-1細胞、NRK-52E細胞、FK81細胞 HEK293E細胞系相關產(chǎn)品:RPMI-7951細胞、H920細胞、Tn-5B1-4細胞 SNU-C1細胞系相關產(chǎn)品:NGP細胞、GLAG-66細胞、Ly7細胞 NIH-3T3-L1細胞系相關產(chǎn)品:Sup T-1細胞、B4G12細胞、RM1細胞 L cells細胞系相關產(chǎn)品:HMC3細胞、M619細胞、MKN 28細胞 PTK 2細胞系相關產(chǎn)品:COLO 699細胞、NS1-Ag4/1細胞、hCMEC/D3細胞 HSCT6細胞系相關產(chǎn)品:LSECs細胞、BI-Mel細胞、SVGp12細胞 SNU-423 Cell:人肝癌細胞系 SHI-1細胞系相關產(chǎn)品:T24(ECV304)細胞、C32r細胞、A 172細胞 PL 5細胞系相關產(chǎn)品:U 266細胞、HT144-mel細胞、D10.G4.1細胞 A 2780 CP細胞系相關產(chǎn)品:SW-620細胞、SKNBE-1細胞、NCI-H1838細胞 HT 1197.T細胞系相關產(chǎn)品:RBSMC細胞、RMS 13細胞、KNS-42細胞 LLC-MK2細胞系相關產(chǎn)品:Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5細胞、PC3細胞、L-M (TK-)細胞 T98-G細胞系相關產(chǎn)品:H-28細胞、D341 Med細胞、OV1/P細胞 TALL1細胞系相關產(chǎn)品:VERO76細胞、293-H細胞、SHZ-88細胞 HeLa 229細胞系相關產(chǎn)品:NTERA-2cl.D1細胞、LS 180細胞、FRTL5細胞 KP-4細胞系相關產(chǎn)品:ES-2細胞、IR983F細胞、P-19細胞 KP-4細胞系相關產(chǎn)品:ES-2細胞、IR983F細胞、P-19細胞 1.1B4細胞系相關產(chǎn)品:LN-18細胞、GM637A細胞、Human Kidney-2細胞 SNUC2A細胞系相關產(chǎn)品:A 549細胞、Panc_02_03細胞、Michigan Cancer Foundation-12A細胞 Hs 863.T細胞系相關產(chǎn)品:CHO-Lec1細胞、A431細胞、WEHI-231細胞 VK2 (E6/E7)細胞系相關產(chǎn)品:COLO-320細胞、GM0637細胞、CNE1-LUC細胞 NU-GC-3細胞系相關產(chǎn)品:MGC803細胞、ACCM細胞、MC 116細胞 Emory University-2細胞系相關產(chǎn)品:ME 180細胞、MDA-MB-157細胞、HIT clone T15細胞 Ocular Choroidal Melanoma-1細胞系相關產(chǎn)品:XuanWei Lung Cancer-05細胞、A375-SM細胞、CHP 212細胞 He-La細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H1703細胞、J 82細胞、THP1細胞 PaTu8988s細胞系相關產(chǎn)品:Hs863T細胞、HCEC-B4G12細胞、HPBALL細胞 A204細胞系相關產(chǎn)品:HuT 102細胞、KY-270細胞、TK10細胞 NCI-H2342細胞系相關產(chǎn)品:174xCEM.T2細胞、NCIH889細胞、hEEC細胞 GLC-82細胞系相關產(chǎn)品:C2C12細胞、NCI-H292細胞、1E8-H細胞 SW-1088細胞系相關產(chǎn)品:CEMO-1細胞、C17細胞、PL45細胞 PANC-04-03細胞系相關產(chǎn)品:MPC-83細胞、ADR-RES細胞、H-II-E-C3細胞 H-250細胞系相關產(chǎn)品:H520細胞、Functional Liver Cell-7細胞、OUMS-27細胞 NCI-H250細胞系相關產(chǎn)品:H-295細胞、H1341細胞、NCI-H226細胞 H-128細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H125細胞、UO-31細胞、H-9細胞 H1915細胞系相關產(chǎn)品:MNNG/HOS細胞、AD293細胞、SCC 25細胞 RAW264.7細胞系相關產(chǎn)品:SK MEL 5細胞、U-266細胞、Panc02-H0細胞 Hs940.T細胞系相關產(chǎn)品:293 HEK細胞、UMNSAH-DF 1細胞、IGROV細胞 KPNRTBM1細胞系相關產(chǎn)品:32D clone3細胞、H 9細胞、CP-70細胞 SuDHL 5細胞系相關產(chǎn)品:Hs 578.Bst細胞、LS-411細胞、ChaGo K-1細胞 COLO-741細胞系相關產(chǎn)品:HPAF2細胞、Swiss/3T3細胞、MDA-435細胞 MCF-10 Attached細胞系相關產(chǎn)品:NCIH929細胞、E6-1細胞、RL952細胞 SKNEP1細胞系相關產(chǎn)品:PG-LH7細胞、BV173細胞、HT3細胞 MIMVEC細胞系相關產(chǎn)品:A2780細胞、CCLP1細胞、SW-780細胞 C-6細胞系相關產(chǎn)品:MRC9細胞、JIMT細胞、GM-637細胞 WM2664細胞系相關產(chǎn)品:A-172 MG細胞、P3J HR1-K細胞、KYSE 50細胞 H-774細胞系相關產(chǎn)品:GM00637細胞、SKNBE細胞、GB-1細胞 NKM1細胞系相關產(chǎn)品:ECC 10細胞、RD-2細胞、766T細胞 EFO 27細胞系相關產(chǎn)品:TU 686細胞、Kit-225細胞、JB6 [Mouse]細胞 GA-10細胞系相關產(chǎn)品:NIH3T3-L1細胞、HIEC-6細胞、K1細胞 Duke University 4475細胞系相關產(chǎn)品:SUM-190PT細胞、EM3細胞、CMT64細胞 SNU-423 Cell:人肝癌細胞系 Hep G2-Luc細胞系相關產(chǎn)品:SUDHL-5細胞、A673細胞、Ls-174-T細胞 HEK293-H細胞系相關產(chǎn)品:SKNMC細胞、OCI AML4細胞、U87MG細胞 GM637A細胞系相關產(chǎn)品:HO-8910 PM細胞、686LN-M4e細胞、Hs 746.T細胞 NCI-H2085細胞系相關產(chǎn)品:L-6細胞、H-7721細胞、HT55細胞 NCI-H1648細胞系相關產(chǎn)品:CT26-clone 25細胞、UPCI:SCC154細胞、MSTO-211H細胞 CMT.64細胞系相關產(chǎn)品:Mv.1.Lu細胞、NCI-H2135細胞、Mel-RM細胞 NCI-HUT-520細胞系相關產(chǎn)品:P3J 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