標(biāo)簽：Tris，HEPES，區(qū)別

   在很多的生化實(shí)驗(yàn)中，需要用到生物緩沖劑，它的作用主要是能夠抵制外界少量強(qiáng)酸和強(qiáng)堿的影響，給反應(yīng)體系提供一個(gè)最合適的pH值。我們最常用的緩沖液有Tris緩沖液和HEPES緩沖液，很多人常常分不清楚二者的區(qū)別，這里德晟公司將給大家做一個(gè)介紹：

生物緩沖劑系列

簡介及應(yīng)用：

  Tris緩沖液：三羥甲基氨基甲烷（Tris）為弱堿性，在25°C下pKa為8.1，其緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0~9.2之間，在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的pH值為6.8、7.4、8.0、8.8。常在電泳和凝膠實(shí)驗(yàn)中起緩沖作用，并被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑，還可用于線蟲的中間纖維的形成。其衍生的TE、TAE、TBE等緩沖液，常用于DNA的穩(wěn)定、存儲(chǔ)以及提取。

HEPES（4-羥乙基哌嗪乙磺酸）：是一種兩性離子生物緩沖劑，屬于Good’s緩沖液，有效緩沖范圍6.8~8.2，可廣泛應(yīng)用于多種生物化學(xué)反應(yīng)，并在某些細(xì)胞培養(yǎng)基中用作緩沖試劑。其使用終濃度為10~50mmol/L，一般培養(yǎng)液內(nèi)含20mmol/L即可達(dá)到緩沖能力。此外，由于無細(xì)胞毒性，HEPES緩沖液常用于細(xì)胞器和極易變性的、對(duì)pH敏感的蛋白質(zhì)和酶的研究工作，以及生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。

兩種緩沖液的特征 

Tris緩沖溶液：

1、本身呈堿性，只用Tris-HCl緩沖體系即可配制pH范圍由酸性到堿性的緩沖液，并且可以與其他物質(zhì)組成多種緩沖體系，如TE、TBS、TAE、TBE等衍生緩沖液；

2、對(duì)生物化學(xué)過程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀；

3、受溶液濃度影響大，稀釋十倍，pH值變化大于0.1；

4、受環(huán)境影響較大，一般來說，溫度每升高一度，pH值下降0.03；

5、易吸收空氣中的CO₂。

HEPES緩沖液：

1、pKa值介于6.0和8.0之間；

2、在水中具有高溶解度；

3、具有膜不透性，不易穿透生物膜；

4、對(duì)生化反應(yīng)影響有限，可耐化學(xué)作用和酶解作用，且不與金屬離子生成復(fù)合物或沉淀；

5、有極低的可見光和紫外光吸收； 

6、離子濃度、溶液組成和溫度對(duì)解離的影響??；

緩沖液配制方法

 1、Tris-HCl緩沖液的配制有兩種方法：

①分別配制0.05mol/L Tris和0.05mol/L HCl溶液，然后按常用表中所列體積混合即可。由于標(biāo)準(zhǔn)濃度的稀鹽酸不易配制，所以常用第二種方法；
②以配置1L 0.1mol/L的Tris-HCl緩沖液為例：稱12.11g Tris堿溶于950mL～970mL去離子水中，邊攪拌邊滴加4N HCl，用pH計(jì)測定溶液pH值至所需的pH值，然后再加水補(bǔ)足到1L。

2、 HEPES緩沖溶液的配制，根據(jù)用途，一種是單純的HEPES＋NaOH，另一種是HEPES＋鹽：

HEPES＋NaOH （500mL）：119.15g HEPES溶解在400mL蒸餾水中，加0.5~1M的NaOH水溶液調(diào)節(jié)至少所需pH，然后用蒸餾水定容至500mL；
HEPES＋鹽（500mL）：HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na₂HPO₄·7H₂O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調(diào)節(jié)pH值，定容至500mL。

  德晟公司生產(chǎn)的Tris和HEPES緩沖劑，其在緩沖范圍、實(shí)驗(yàn)溫度、以及特征和配制方法上都有一定的差別，在具體實(shí)驗(yàn)中，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行仔細(xì)分析，以選擇最合適的緩沖體系。另外，需要注意的是，在離子交換層析時(shí)，如用陽離子交換柱，要避免使用帶正電的Tris緩沖液，而HEPES屬于兩性離子緩沖液，陰陽兩種離子交換層析都適用。