DNA凝膠回收試劑盒
信裕生物的DNA凝膠回收試劑盒(DNA Gel Extraction Kit),是一種用于從DNA瓊脂糖凝膠中回收目的DNA的試劑盒。 本試劑盒采用了融膠液,可以使瓊脂糖凝膠完全融化。同時采用了一種新型的離子交換柱,在特定條件下,使DNA能在離心過柱的瞬間,結(jié)合到DNA純化柱上,在一定條件下又能將DNA充分洗脫,從而實(shí)現(xiàn)DNA的快速純化。無需酚氯仿抽提,無需酒精沉淀,通常12個樣品只需不足20分鐘即可完成。 每個DNA純化柱可以結(jié)合的DNA量的上限約為15微克。 適用于從DNA瓊脂糖凝膠(agarose gel)電泳后割取的含有目的DNA的凝膠塊中快速提取DNA。該目的DNA通常為PCR產(chǎn)物、質(zhì)粒DNA酶切出來的DNA片段、超螺旋質(zhì)粒DNA單酶切后的線性化產(chǎn)物和DNA連接產(chǎn)物等。 本試劑盒適用于純化100bp-10kb DNA。長至30個堿基的引物均可被完全去除。 DNA回收效率通常為60-90%。接近100bp或10kb的DNA片段回收效率要略低一些,大于10kb的DNA回收效率迅速下降。另外如果樣品中DNA含量特別低也會導(dǎo)致回收效率下降。 本試劑盒純化所得DNA可直接用于酶切,連接,轉(zhuǎn)化細(xì)菌,測序,PCR,雜交等后續(xù)操作。 每個試劑盒足夠用于50個平均重量不超過400微克的凝膠樣品。 包裝清單:
保存條件: 室溫保存,一年有效。 注意事項(xiàng): 次使用前在溶液II(洗滌液)中加入39ml無水乙醇,混勻,并在瓶上做好標(biāo)記。 溶液I對人體有刺激性,操作時請小心,并注意適當(dāng)防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。 本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。 廢液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丟棄。 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。使用說明: 1.切膠回收后,稱重,將膠切碎或在離心管內(nèi)用1ml槍頭搗碎。 2.加入等體積的溶液I(如膠為100mg,則加100微升溶液I),vortex或顛倒混勻。 3.50-60℃水浴加熱約10分鐘至膠全融,期間,需vortex或顛倒混勻3-4次,以加速凝膠融解。 如果膠碎片較小,3-5分鐘即可全融,凝膠碎片較大則需較長時間,膠全融后至少再在50-60℃水浴加熱2分鐘。50-60℃間任一溫度都適合于本試劑盒。如果DNA片段大于5kb,宜顛倒混勻。Vortex容易導(dǎo)致大片段DNA斷裂。 4.加入到DNA純化柱內(nèi), 室溫放置1分鐘。 如果體積較大,DNA純化柱內(nèi)容納不下,可以把部分樣品加入到純化柱內(nèi),經(jīng)離心處理后,再加入剩余的樣品繼續(xù)處理。 5.最高速(16000g,約12000-14000rmp左右)離心1分鐘,倒棄收集管內(nèi)的液體。 注意:這一步一定要達(dá)到16000g,較低離心速度會導(dǎo)致回收效率下降。 6.在DNA純化柱內(nèi)加入700微升溶液II,室溫放置1分鐘。 7.最高速離心1分鐘,洗去雜質(zhì)。倒棄收集管內(nèi)的液體。 8.再加入500微升溶液II,最高速離心1分鐘,進(jìn)一步洗去雜質(zhì)。倒棄收集管內(nèi)的液體。 9.最高速再離心1分鐘,除去殘留液體并讓殘留的乙醇充分揮發(fā)。 10.將DNA純化柱置于1.5毫升離心管上,加入30微升溶液III至管內(nèi)柱面上,放置1分鐘。 用1.5ml離心管作為收集管。溶液III需要直接加至管內(nèi)柱面中央,使液體被純化柱吸收。如果不慎將溶液III沾在管壁上,一定要震動管子,使液體滑落到管底,以便被純化柱吸收。也可以用重蒸水或Milli-Q級純水替代溶液III,但是水的pH應(yīng)不小于6.5。如需得到較高濃度的DNA,可以只加20微升溶液III,但產(chǎn)量會略有下降。放置較長時間例如3-5分鐘,會對提供產(chǎn)量略有幫助。 11.最高速離心1分鐘,所得液體即為高純度DNA。
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