中文名：DNA凝膠回收試劑盒

英文名：DNA gel Recovery Kit

貨號(hào)：D598099

包裝：10t、250t、500t

存儲(chǔ)溫度：室溫

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒適合從各種瓊脂糖凝膠中回收多至8μgDNA(70bp-10Kb)，回收率為60-85%。瓊脂糖凝膠在溫和的緩沖液(DE-A溶液)中熔化，其中的保護(hù)劑能防止線狀DNA在高溫下降解，然后在DE-B溶液的作用下使DNA選擇性結(jié)合到膜上。純化的DNA純度高，并保持片斷完整性和高生物活性，可直接用于連接、體外轉(zhuǎn)錄、PCR 擴(kuò)增、測(cè)序、微注射等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

組分：

組分備注：
Buffer DE-A: 凝膠熔化劑，含DNA保護(hù)劑，防止DNA在高溫下降解，室溫密閉貯存；
Buffer DE-B: 結(jié)合液（促使大于70bp的DNA片段選擇性結(jié)合到DNA制備膜上），室溫密閉貯存；
Buffer W1: 洗滌液，室溫密閉貯存；
Buffer W2 concentrate: 去鹽液，使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無(wú)水乙醇（用100%乙醇或95%乙醇），混合均勻，室溫密閉貯存；
Eluent: 洗脫液，室溫密閉貯存。

注意事項(xiàng)：

1.Buffer DE-A(含有 -基醇)Buffer DE-B 和 Buffer W1 含刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套和眼鏡，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，謹(jǐn)防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要立即用大量清水或生理鹽水沖洗，必要時(shí)尋求醫(yī)療咨詢；

2.在步驟 1 中，將凝膠切成細(xì)小的碎塊可大大縮短凝膠熔化時(shí)間(線型 DNA 長(zhǎng)時(shí)間暴露在高溫條件2.下易于水解)，從而提高回收率。勿將含 DNA 的凝膠長(zhǎng)時(shí)間地暴露在紫外燈下，減少紫外線對(duì) DNA造成的損傷。

3.在步驟 2中凝膠必須完全熔化，否則將嚴(yán)重影響 DNA 回收率；

4.將 Eluent 或去離子水加熱至65°C，有利于提高洗脫效率；

5.DNA 分子呈酸性，建議在 2.5mM Tris-HCl，pH?7.0-8.5洗脫液中保存。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
1.第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定體積的無(wú)水乙醇。
2.準(zhǔn)備無(wú)核酸和核酸酸污染的Tip頭、離心管
3.準(zhǔn)備75°C水浴。
4.使用前，檢查Buffer DE-B是否出現(xiàn)沉淀，若出現(xiàn)沉淀，應(yīng)于70°C溫浴加熱熔化并冷卻至室溫后再使用。

操作步驟：
1.在紫外燈下切下含有目的 DNA 的瓊脂糖凝膠，用紙巾吸盡凝膠表面液體并切碎。計(jì)算凝膠重量(提前記錄 1.5 ml 離心管重量)，該重量作為一個(gè)凝膠體積(如 100 mg=100 μl 體積)。
2.加入3個(gè)凝膠體積的 Buffer DE-A，混合均后于75C 加熱(低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠于 40 加熱),間斷混合(每2-3 min)，直至凝膠塊完全熔化(約6-8 min)Buffer DE-A 為紅色溶液。在熔化凝膠的過(guò)程中，可以幫助觀察凝膠是否完全熔化。
3.加0.5個(gè) Buffer DE-A 體積的 Buffer DE-B，混合均。當(dāng)分離的DNA 片段小于 400bp 時(shí)，需再加入1個(gè)凝膠體積的異丙醇。
*加 Buffer DE-B 后混合物顏色變?yōu)辄S色，充分混勻以保證形成均一的黃色溶液。
步驟 4-6 可以選擇負(fù)壓法或離心法。
A.負(fù)壓法
4A.正確連接負(fù)壓裝置，將 DNA 制備管插到負(fù)樂(lè)裝置的插口上。吸取步 3 中的混合液，轉(zhuǎn)移到制備管中，開(kāi)啟并調(diào)節(jié)負(fù)壓至-25-30 英寸汞柱，緩慢吸走管中溶液。
5A.加500 l Buffer W1，吸盡管中溶液。
6A.加700 ul Buffer W2，吸盡管中溶液。以同樣的方法再用 700 l Buffer W2洗滌一次，確認(rèn)在 Buffer W2 concentrate 中已按試劑瓶上的指定體積加入無(wú)水乙醉。
·兩次使用 Buffer W2 沖洗能確保鹽份被完全清除，消除對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的影響。
7A.將制備管置于2ml 離心管 (試劑盒提供)中，12,000xg 離心1min。

B，離心法
4B.吸取步驟3 中的混合液，轉(zhuǎn)移到 DNA 制備管(置于 m 離心管(試劑內(nèi)提供))中，12000Xg 離心1min。棄濾液。
5B.將制備管置回2 ml離心管，加500 l Buffer W1，12,000Xg 離心30 s，棄濾液。
6B.將制備管置回2 ml 離心管，加 700 l Buffer W2，12,000Xg 離心30s，棄濾液。以同樣的方法再用 700 ul Buffer W2 洗滌一次 12,000xg 離心1min。，確認(rèn)在 Buffer W2 concentrate 中已按過(guò)劑瓶上的指定體積加入無(wú)水乙醉兩次使用 Buffer W2 沖洗能確保鹽份被完全清除，消除對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的影響。
7B，將制備管置回2ml 離心管中，12,000Xg 離心1min。
8.將制備管置于潔凈的 1.5 m 離心管中，在制備膜中央加 25-30 Euent 或去離子水，室溫靜置1min。12,000xg 離心1min 洗脫DNA。

將 Eluent 或去離子水加熱至 65C將提高洗脫效率

應(yīng)用范圍：

核酸提取及純化

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