pFastBac1-EGFP (桿狀病毒包裝陽性對(duì)照質(zhì)粒)

pFastBac1-EGFP是以pFastBac1為基礎(chǔ)構(gòu)建的用于在昆蟲細(xì)胞表達(dá)EGFP的質(zhì)粒。在polyhedrin (PH)啟動(dòng)子的作用下，可以高效啟動(dòng)EGFP在昆蟲細(xì)胞(如Sf9和Sf21等)中的表達(dá)。
在采用Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)目的蛋白時(shí)，pFastBac1-EGFP可以用作監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染、病毒包裝和目的蛋白表達(dá)效果的對(duì)照質(zhì)粒。表達(dá)的EGFP有很強(qiáng)的綠色熒光，在熒光顯微鏡下可以非常方便地觀察轉(zhuǎn)染、病毒包裝和表達(dá)的效果。
pFastBac1是基于Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而設(shè)計(jì)的表達(dá)載體。Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)是由Luckow等人于1993年發(fā)展的一種快速而有效產(chǎn)生重組桿狀病毒的方法。該系統(tǒng)主要包括以下兩個(gè)組分：(1)用于插入目的基因的pFastBac載體，目的基因如EGFP等插入后受桿狀病毒特異性啟動(dòng)子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin啟動(dòng)子調(diào)控表達(dá)；(2)含桿狀病毒穿梭載體bacmid (bMON14272, 136kb)和輔助質(zhì)粒(helper plasmid，用于表達(dá)轉(zhuǎn)座必須的轉(zhuǎn)座蛋白)的大腸桿菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。將pfastBac重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化該菌株可發(fā)生pfastBac重組質(zhì)粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7發(fā)生轉(zhuǎn)座，從而形成重組的bacmid。位點(diǎn)特異的轉(zhuǎn)座會(huì)破壞宿主的lacZα基因，從而可通過藍(lán)白斑篩選重組克隆。PCR等方法鑒定重組克隆后，提取重組的bacmid轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞，可以產(chǎn)生重組桿狀病毒，并表達(dá)目的蛋白如EGFP等。擴(kuò)增重組的桿狀病毒并感染昆蟲細(xì)胞，就可以大量表達(dá)純化目的蛋白了。
pFastBac1-EGFP質(zhì)粒的主要信息如下：

pFastBac1-EGFP質(zhì)粒(5397bp)的圖譜如下：

pFastBac1-EGFP的詳細(xì)圖譜如下：

pFastBac1-EGFP中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-EGFP)包括：

      pFastBac1-EGFP中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pFastBac1-EGFP once)包括：

pFastBac1-EGFP的全序列信息請(qǐng)參考信裕生物的網(wǎng)站上該質(zhì)粒的信息。
pFastBac1-EGFP質(zhì)粒使用信裕生物研發(fā)的LipoInsect™轉(zhuǎn)染試劑(C0551)轉(zhuǎn)染SF9細(xì)胞的效果參考圖1。

圖1. pFastBac1-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH10Bac，獲得的重組bacmid用信裕生物生產(chǎn)的LipoInsect™轉(zhuǎn)染試劑(C0551)轉(zhuǎn)染SF9細(xì)胞4天后的效果圖。左側(cè)為明場(chǎng)照片，右側(cè)為熒光照片。
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