生物素隨機(jī)引物DNA標(biāo)記試劑盒
生物素隨機(jī)引物DNA標(biāo)記試劑盒(Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)是一種通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)產(chǎn)生生物素標(biāo)記DNA探針的試劑盒。本試劑盒標(biāo)記的生物素DNA探針可以用于常規(guī)的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位雜交等。
在Klenow酶(Klenow fragment,3'-5'exo-)催化下，通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)(random prime labeling)可以把生物素標(biāo)記的Biotin-11-dUTP摻入到新合成的DNA探針中，這樣就可以產(chǎn)生生物素標(biāo)記的DNA探針。在隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)過程中，一些標(biāo)記好的DNA探針可以被Klenow酶從模板DNA鏈上驅(qū)趕下來。這樣在模板量較少的情況下，通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)，最后可以產(chǎn)生比模板DNA量更多的生物素標(biāo)記DNA探針，可多達(dá)1-15倍左右。
本試劑盒可以用于多種DNA模板的標(biāo)記，包括DNA片段、線性化的質(zhì)?；騝osmid、超螺旋DNA等。用于本試劑盒的模板DNA片段應(yīng)不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用信裕生物生產(chǎn)的生物素3'末端DNA標(biāo)記試劑盒(D3106)進(jìn)行DNA探針標(biāo)記。
用于本試劑盒的模板DNA的量應(yīng)不少于10ng，推薦的模板用量為100ng-1μg。
本試劑盒中提供了已經(jīng)用生物素標(biāo)記好的Biotin-Control DNA，可以用作檢測生物素DNA探針標(biāo)記效率的對照。
生物素標(biāo)記DNA可以使用信裕生物生產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測試劑盒(D3308)或其它適當(dāng)試劑盒進(jìn)行檢測。
本試劑盒可以用于10個(gè)標(biāo)記反應(yīng)。
包裝清單：
KL-3118-1
Random Primer in Buffer(5X)
105μl
KL-3118-2
Klenow Fragment
11μl
KL--3118-3
Biotin-Labeling Mix
50μl
KL-3118-4
Ultrapure Water
1ml
KL-3118-5
Biotin-Control DNA(3ng/μl)
50μl
KL-3118-6
探針標(biāo)記終止液
100μl
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
需自備用于探針標(biāo)記效率檢測的相關(guān)試劑。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 在一離心管或PCR管內(nèi)加入100ng-1μg DNA模板，再加入適量試劑盒提供的Ultrapure Water，至總體積為34μl。
說明：通常100-300ng DNA模板已經(jīng)足夠用于一次標(biāo)記反應(yīng)。
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X)，混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
3. 沸水浴加熱5分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5分鐘(如果不能設(shè)置100℃，99℃加熱5分鐘也完全可以)。
4. 立即放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的冰水浴中至少2-3分鐘。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment，混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
7. 37℃孵育1小時(shí)或過夜(不宜超過20小時(shí))。37℃孵育過夜可以顯著增加生物素標(biāo)記DNA的產(chǎn)量，因此推薦孵育過夜(12-20)小時(shí)。
8. 加入3μl探針標(biāo)記終止液，混勻，終止標(biāo)記反應(yīng)。至此標(biāo)記反應(yīng)已經(jīng)全部完成，標(biāo)記好的DNA可以-20℃保存。
9. 此時(shí)探針可以直接用于探針標(biāo)記效率的檢測及Southern、Northern等后續(xù)操作。
10. 整個(gè)探針標(biāo)記反應(yīng)的流程參見下表：
Random Primer in Buffer (5X)
10μl
此時(shí)可用于標(biāo)記效率的檢測及Southern、Northern等后續(xù)檢測
11. 探針標(biāo)記效率的檢測：可以對標(biāo)記好的探針進(jìn)行適當(dāng)梯度稀釋后，使用信裕生物生產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測試劑盒(D3308)或其它適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行檢測。通常探針的標(biāo)記效率可以參考下表：
注意：具體的探針標(biāo)記效率還和模板DNA的長度、純度等因素有關(guān)，上表的數(shù)值僅供參考。
12. 使用本試劑盒所獲得的生物素標(biāo)記DNA的長度通常在數(shù)百bp左右。具體的長度因模板的長度而有所不同。例如模板DNA的長度為1kb，則生物素標(biāo)記DNA產(chǎn)物的長度通常為100-1000bp，平均長度約為300bp左右。
關(guān)鍵字： 生物素隨機(jī)引物DNA標(biāo)記試劑盒說明書；生物素隨機(jī)引物DNA標(biāo)記試劑盒廠家
上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品?？偛课挥谏虾＃⒃诒本?、廣東，江西，吉林等全國30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。