Gel-Green (EB升級換代產(chǎn)品, 10000X)
信裕生物的Gel-Green(凝膠綠)核酸染料是一種EB (Ethidium bromide,溴化乙錠)的升級換代產(chǎn)品,用于凝膠中DNA、RNA等核酸的染色。Gel-Green具有安全(未檢測到致突變性和細(xì)胞毒性)、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,凝膠中的核酸在使用本產(chǎn)品后經(jīng)約500nm波長藍(lán)光(也可以使用約260nm紫外光)激發(fā)呈現(xiàn)綠色熒光,適用于原先使用SYBR Green或SYBR Gold為核酸染料的凝膠成像和檢測系統(tǒng)。 由于Gel-Green在500nm左右處有的激發(fā)波長,可以使用對人體無害的藍(lán)光燈或藍(lán)光成像儀進行核酸檢測,從而避免常規(guī)的紫外檢測對核酸樣品的致突變性,以及紫外對人的眼睛和皮膚的傷害。特別在切膠回收時,使用Gel-Green并用藍(lán)光燈具有很大的優(yōu)勢,不僅可以避免核酸樣品的突變,也可以避免紫外光對人體的傷害。 Gel-Green比EB或SYBR Green更安全。Gel-Green在遠(yuǎn)高于其工作濃度范圍時均沒有細(xì)胞毒性及誘變性。艾姆斯氏試驗(Ames test)結(jié)果表明,即使在S9代謝活化時,也沒有檢測到致突變性。Gel-Green和信裕生物另外一種安全型核酸染料Gel-Red,由于它們特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以進入細(xì)胞,從而大大降低甚至避免了染料的致突變性和細(xì)胞毒性。艾姆斯氏試驗結(jié)果表明,Gel-Green比Gel-Red更安全,即便在S9代謝活化時,當(dāng)Gel-Green濃度高達約20微克/毫升時,也沒有檢測到致突變性。而SYBR Green染料可以穿透細(xì)胞膜,進入活細(xì)胞并染色DNA。并且有報道SYBR Green可以強烈增強紫外線誘導(dǎo)的基因突變。 Gel-Green檢測靈敏度高,對于小分子量核酸的染色效果好。Gel-Green的檢測靈敏度比EB高8-10倍,在檢測低濃度、微量DNA或RNA方面比EB更佳,尤其對小分子量的DNA檢測非常靈敏。在使用浸泡染色法時,Gel-Green和SYBR Gold的靈敏度相近甚至更高;與SYBR Gold不同的是,Gel-Green預(yù)先配制在凝膠中也有很高的靈敏度。EB對于小分子量核酸染色效果差,而Gel-Green對于小分子量核酸的染色效果很好,便于觀察酶切或PCR獲得的小分子量核酸片段。本說明書推薦使用的Gel-Green濃度,其檢測效果略優(yōu)于EB。如果希望獲得更高的染色靈敏度,可以適當(dāng)提高Gel-Green的工作濃度。 Gel-Green的穩(wěn)定性好,染色重復(fù)性高。含SYBR Green的凝膠核酸染色的重復(fù)性比較差,這通常是由于SYBR系列染料的穩(wěn)定性差導(dǎo)致的。而Gel-Green的穩(wěn)定性很好,可以室溫長時間保存及使用微波爐加熱。Gel-Green的光穩(wěn)定性良好,可以在室內(nèi)正常光線下操作而無需避光。由于其熱穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性,含Gel-Green的凝膠在核酸染色時的重復(fù)性非常好。 Gel-Green可以使用和SYBR Green或EB相同的檢測體系。Gel-Green具有和SYBR Green或SYBR Gold幾乎相同的光學(xué)性質(zhì),兩者的激發(fā)光和發(fā)射光都非常接近,這樣可以直接用Gel-Green替換SYBR Green,以使用SYBR Green的凝膠觀察、拍照或成像系統(tǒng)(約500nm激發(fā))。對于原來用于EB染料觀察的系統(tǒng),可以考慮選用信裕生物的替代Gel-Red染料來替代EB,但也可以使用沒有致突變性的Gel-Green來替代EB。使用Gel-Green來替代EB,并且用EB的紫外檢測體系時,檢測靈敏度會比使用Gel-Red低約4-5倍。對于既可以觀察EB也可以觀察SYBR Green的具有紫外和藍(lán)光兩種激發(fā)光的凝膠成像系統(tǒng),則推薦直接用Gel-Green來替換EB。Gel-Green的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜請參考圖1。
圖1. Gel-Green的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜
Gel-Green的使用方法和EB一致。Gel-Green可以按適當(dāng)比例直接加入瓊脂糖中配制成凝膠,也可以在電泳完畢后對凝膠進行染色。前者更加方便,而后者靈敏度要更加高一些。但由于Gel-Green本身已經(jīng)非常靈敏,通常采用把Gel-Green直接配制在凝膠中就可以了。對于一些特殊的情況,如核酸樣品量特別少的情況等,則可以考慮電泳后再對凝膠進行染色。 Gel-Green對于核酸的遷移率影響非常小,小于SYBR Green對于核酸遷移率的影響。 通過凝膠回收試劑盒(如信裕生物或Qiagen的凝膠回收試劑盒)或酚氯仿抽提,可以有效去除與DNA或RNA結(jié)合的Gel-Green,從而確保不會影響后續(xù)的連接、酶切、PCR、測序等常規(guī)的分子生物學(xué)用途。 使用說明: Gel-Green和EB(溴化乙錠)一樣可以根據(jù)使用者的偏好或?qū)嶒災(zāi)康牟捎靡韵路椒ㄖ械囊环N: 1. 瓊脂糖凝膠中添加Gel-Green。 根據(jù)需要配制適當(dāng)濃度(例如1-3%)的瓊脂糖膠液。在瓊脂糖完全融解后,適當(dāng)冷卻但又不會使瓊脂糖凝固時,按照每100毫升膠液加入10微升Gel-Green的比例(10000:1)加入Gel-Green。混勻后即可把瓊脂糖膠液倒入制備凝膠的模具中。適當(dāng)量的DNA或RNA在該膠中電泳后,用約500nm波長藍(lán)光激發(fā)或相應(yīng)的凝膠成像系統(tǒng)檢測(也可以使用常規(guī)的紫外燈或紫外凝膠成像檢測系統(tǒng)),就可以觀察到明亮的核酸條帶。說明:Gel-Green非常穩(wěn)定,所以Gel-Green可以像EB一樣在瓊脂糖凝膠液加熱融解后但未凝固前加入并混勻,也可以在瓊脂糖融解前加入然后再微波爐加熱融解并混勻。 2. 電泳完畢后對瓊脂糖凝膠染色。 按照每100毫升100mM NaCl溶液或水中加入20-40微升Gel-Green的比例(2500-5000:1)加入Gel-Green,配制成Gel-Green染色液。把電泳完畢的瓊脂糖凝膠放到適當(dāng)?shù)娜萜髦?,加入適量上述配制好的Gel-Green染色液,確保至少蓋住凝膠。在搖床上緩慢搖動(30-50rpm)染色20-30分鐘。染色的時間根據(jù)膠的厚度而定,膠厚則染色時間需要長一些,膠薄則染色時間可以短一些。染色完畢后,在紫外燈下即可觀察DNA條帶。要觀察到更為清晰的條帶,可以在染色后用水漂洗1-2次,每次3-5分鐘,以消除背景,然后用約500nm波長藍(lán)光激發(fā)或相應(yīng)的凝膠成像系統(tǒng)檢測(也可以使用常規(guī)的紫外燈或紫外凝膠成像檢測系統(tǒng))。Gel-Green染色液可以重復(fù)使用3次左右。Gel-Green染色液也可以一次大量制備,在室溫下避光保存,直至用完。對于核酸需要回收的情況,操作過程中需要注意避免核酸酶污染。
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