Blood PCR Enhancer (2X)

信裕生物研發(fā)的Blood PCR Enhancer (2X)，即耐血PCR增強(qiáng)劑(2X)，是一種使用信裕生物的D7241 HemoTaq™ DNA Polymerase (Blood-resistant)或D7243 HemoTaq™ HF DNA Polymerase (Blood-resistant)時(shí)，克服因模板高GC含量所導(dǎo)致的PCR擴(kuò)增障礙的PCR增強(qiáng)劑。高GC含量DNA片段的擴(kuò)增一直是分子生物學(xué)操作過程中的一個(gè)難點(diǎn)，本產(chǎn)品可用于含有肝素、檸檬酸鈉以及EDTA等抗凝血的直接PCR反應(yīng)，從而大大提高了高GC含量DNA模板的擴(kuò)增效率及擴(kuò)增的特異性。本產(chǎn)品也可以用于普通PCR時(shí)擴(kuò)增高GC含量的目的片段。
Blood PCR Enhancer (2X)可以適用于商業(yè)化的常見的多種耐血DNA聚合酶，如信裕生物的D7241 HemoTaq™ DNA Polymerase (Blood-resistant)和D7243 HemoTaq™ HF DNA Polymerase (Blood-resistant)，NEB的Hemo KlenTaq等。
本產(chǎn)品直接擴(kuò)增EDTA抗凝血中高GC含量基因的效果參考圖1。
圖1.使用Blood PCR Enhancer (2X)擴(kuò)增高GC含量目的基因的電泳效果圖。圖A中可見，HRES1基因488bp片段(GC含量81%)和DIP2A基因1185bp片段(GC含量71%)，在添加Blood PCR Enhancer (2X)后可以擴(kuò)增出單一的非常明亮的特異性條帶，但不添加時(shí)就不能擴(kuò)增獲得特異性的目的條帶。圖B中可見，擴(kuò)增HRES1基因488bp片段(GC含量81%)時(shí)，使用信裕生物生產(chǎn)的本產(chǎn)品能擴(kuò)增出單一的條帶，而使用公司A和B的類似產(chǎn)品主帶比較微弱并且雜帶很多，使用常見的最終濃度為1.3M的甜菜堿(Betaine)的擴(kuò)增高GC含量的該片段時(shí)效果也欠佳。
本產(chǎn)品如果用于50微升的PCR反應(yīng)體系，足夠用于80個(gè)反應(yīng)；如果用于20微升的PCR反應(yīng)體系，足夠用于200個(gè)反應(yīng)。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
在使用本產(chǎn)品Blood PCR Enhancer (2X)的同時(shí)，必須同時(shí)使用和耐血DNA聚合酶配套的最終濃度為1X的PCR Buffer。
本產(chǎn)品溶解時(shí)如果有結(jié)晶狀沉淀物，可以在50℃水浴溫育片刻促進(jìn)溶解，并確保完全溶解后使用。
請(qǐng)盡量使用新近采集的抗凝血樣本進(jìn)行檢測；如果是凍存的樣本，盡量避免反復(fù)凍融，以免在凍融過程中導(dǎo)致目的基因的斷裂和降解。
設(shè)置PCR反應(yīng)體系時(shí)，抗凝血的推薦用量為PCR體系總體積的5-10%左右，可以直接添加到PCR體系中，無需進(jìn)行任何額外處理。
PCR反應(yīng)結(jié)束之后，建議3000-5000g離心3-5min以沉淀血細(xì)胞碎片，便于吸取上清用于電泳分析等。注意：由于抗凝血本身的原因，PCR結(jié)束后在PCR管底部會(huì)出現(xiàn)透明凝膠狀物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象。
由于PCR反應(yīng)非常靈敏，可以擴(kuò)增目的基因序列超過1000萬倍，在操作時(shí)請(qǐng)注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對(duì)照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
 

使用說明：
1.PCR反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置請(qǐng)參照特定的耐血DNA聚合酶的說明書進(jìn)行。通常對(duì)于擴(kuò)增高GC含量的DNA模板，延伸時(shí)間可以比常規(guī)的延伸時(shí)間適當(dāng)延長一些。
2.PCR反應(yīng)體系的設(shè)置可以參考特定的耐血DNA聚合酶進(jìn)行，僅僅添加反應(yīng)總體積一半的本試劑盒所提供的Blood PCR Enhancer (2X)即可。可以參考如下反應(yīng)體系設(shè)置PCR反應(yīng)：
a.融解并混勻PCR反應(yīng)所需的各種溶液。將HemoTaq™ DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒內(nèi)。
b.參考下表在冰浴上設(shè)置PCR反應(yīng)體系(如果有多個(gè)類似的PCR反應(yīng)，可以先配制大體積的包含水、buffer、dNTP和HemoTaq™酶的混合物，然后分裝到各PCR反應(yīng)管內(nèi)。根據(jù)情況，有時(shí)混合物中也可以包括引物)：

注意：
(a)模板使用量：作為PCR模板的抗凝血用量一般為PCR反應(yīng)體系總體積的1-20%，建議起始使用量為5%。如果PCR反應(yīng)用于檢測基因組的DNA片段，可以適當(dāng)減少抗凝血用量；如果用于檢測血液樣品中某種病毒或細(xì)菌等微生物的目的DNA片段，建議使用50μl的PCR體系，并使用較大的模板血量。對(duì)于高GC含量的PCR擴(kuò)增，可以使用擴(kuò)增高GC含量DNA片段的D7245 Blood PCR Enhancer (2X)，或者嘗試向PCR體系中加入終濃度1-10% (體積百分比)的DMSO。
(b)引物濃度：通常引物的終濃度為0.5μM時(shí)可獲得良好的檢測效果，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0μM范圍內(nèi)調(diào)整引物的終濃度。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度。
c.用移液器輕輕吹打混勻或輕微Vortex混勻，室溫離心數(shù)秒，使液體積聚于管底。
d.如果所使用的PCR儀有熱蓋則省略本步驟。如果PCR儀沒有熱蓋，則在管內(nèi)滴入一滴礦物油(ST275 Mineral oil (礦物油))。
e.把設(shè)置好的PCR反應(yīng)體系置于PCR儀上，開始PCR反應(yīng)。PCR反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置可以參考該耐血DNA聚合酶的常規(guī)參數(shù)，同時(shí)可以考慮適當(dāng)延長延伸時(shí)間。