超敏型BCA法蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是在 BCA 法蛋白定量試劑盒（CAT#:80815-500）基礎(chǔ)上改進(jìn)的超敏蛋白定量試劑盒，尤其適合對(duì)低濃度的蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行定量分析。它具有下列特點(diǎn)。

1. 超敏感，最低檢測(cè)濃度為 0.5μg/mL。

2. 線性范圍在 0.5～20μg/mL，尤其適用于低濃度的樣品。

3. 對(duì)大多數(shù)離子型和非離子型去污劑不敏感，但對(duì) Cu 的還原劑和螯合劑敏感。

4. 比 Lowry 法更加簡(jiǎn)單快捷，45 分鐘內(nèi)完成測(cè)定。

5. 試劑穩(wěn)定，但工作液 1 天內(nèi)有效。

6. 終產(chǎn)物穩(wěn)定，檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量。

7. 最短可以檢測(cè)雙肽，所以適合于分子量較小的蛋白質(zhì)，而 Bradford 法需要一定大小的蛋白質(zhì)。

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，但 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品需要低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 樣品緩沖液 

使用方法

1. 用合適的方法制備待測(cè)蛋白樣品，并把蛋白質(zhì)溶解在合適的樣品緩沖液中。

本檢測(cè)方法受待測(cè)樣品中螯合劑和還原劑的影響，所以需確保蛋白溶液中，

EDTA 的終濃度不高于 10mM、二硫蘇糖醇不高于 1mM、β-巰基乙醇不高

于 1mM，沒(méi)有任何 EGTA。如果達(dá)不達(dá)上述要求，則需要稀釋樣品，使其

濃度降低到上述濃度之下。

2. 將本試劑盒提供的 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品（2 mg/

溶液 C 混合即可，所得溶液即超敏 BCA 工作液。

4. 取一塊 96 孔板，按下表加入上步新鮮制備的 BSA 工作液、待測(cè)蛋白樣品和

自備樣品緩沖液：

編號(hào) BSA 工作液

（μL）

待測(cè)樣品

（μL）

樣品緩沖液

（μL）

總體積

（μL）

蛋白含量

（μg）

0 0 0 150 150 0

1 5 0 145 150 0.2

2 10 0 140 150 0.4

3 20 0 130 150 0.8

4 40 0 110 150 1.6

5 60 0 90 150 2.4

6 80 0 70 150 3.2

7 100 0 50 150 4.0

N 個(gè)待測(cè)樣品 0 μL 補(bǔ)到 150 150 待測(cè)

5. 在每個(gè)孔中加入 1 倍體積（即 150 μL）的超敏 BCA 工作液并混勻。如果用

排槍加入并混勻則更好。也可把 96 孔板放在振蕩器上振蕩 30 秒混勻。

6. 60℃放置 1 小時(shí)。

7. 冷至室溫，迅速在 562 nm 下比色測(cè)定其余樣品的光吸收。如酶標(biāo)儀沒(méi)有

562 nm 的設(shè)定，可用接近的波長(zhǎng)檢測(cè)，如 570nm。測(cè)定操作在 10 分

鐘內(nèi)完成，否則化學(xué)反應(yīng)還在繼續(xù)進(jìn)行，光吸收值每 10 分鐘會(huì)升高 2.5%左

右。

8. 處理數(shù)據(jù)：將編號(hào)為 0 號(hào)的樣品（對(duì)照）的讀數(shù)從其余所有樣品（包括 0 號(hào)

樣品，其讀數(shù)變成零）中扣除。

9. 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：以 0-7 號(hào)樣品的 BSA 含量（單位 μg，見(jiàn)上表最右行）為橫

坐標(biāo)，以上一步得到的樣品吸光值（扣除背景讀數(shù)的）為縱坐標(biāo)，繪出 BSA

的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

10. 再將 N 個(gè)待測(cè)樣品的吸光值（減去 0 號(hào)樣品的讀數(shù)后）標(biāo)在標(biāo)準(zhǔn)曲線上，其

在橫坐標(biāo)上對(duì)應(yīng)的蛋白含量（μg）就是待測(cè)樣品中的蛋白質(zhì)含量，除以樣品

稀釋液總體積（20μL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度（單位：

μg/μL）。

二：注意事項(xiàng)

11. 加工作液后也可以在室溫放置 2 小時(shí)，或 60℃放置 30 分鐘。超敏 BCA 法

測(cè)定蛋白濃度時(shí)，吸光度會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫

度升高而加快。所以，如果蛋白質(zhì)濃度較低，可以改在 60℃孵育 60 分鐘。

12. 待測(cè)樣品濃度在 20～2000 μg/mL 范圍時(shí)有較好的線性關(guān)系。

13. 超敏 BCA 法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，不受下列化學(xué)物質(zhì)的影響：

名稱(chēng) 濃度小于下面數(shù)值時(shí)不受影響

Ammonium S μLfate 1.5 M

Brij-35 5.0%

CHAPS 5.0%

EDTA 10 mM

Hepes 100 mM

Glycine, pH 2.8 100 mM

Guanidine HCl 4.0 M

Tween 20、60、80 5.0%

SDS 5.0%

Sodium Acetate pH 5.5 200 mM

Sodium Chloride (NaCl) 1.0 M

Sucrose 40%

Sodium Hydroxide (NaOH) 0.1 M

NP-40 5.0%

Triton X-100 5.0%

Urea 3.0 M

本試劑受溫度和時(shí)間影響較大，故需要準(zhǔn)確定時(shí)和定溫，以保證精確定量。