大腸桿菌Stbl3化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是衍生自大腸桿菌 HB101 菌株，經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞。特別適 用于克隆不穩(wěn)定載體片段，如含有同向重復(fù)序列的慢病毒 DNA 和其他反轉(zhuǎn)錄病毒載體。使 用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 此菌株具有鏈霉素抗性，不存在 lacIqZΔM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。

2. 本產(chǎn)品是復(fù)制慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株，對(duì)慢病毒載體等較大的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的效 果好，能夠有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組，減低錯(cuò)誤重組的可能性。

3. 非常穩(wěn)定，能提高慢病毒載體或其他不穩(wěn)定載體的克隆效率。

4. 菌株基因型為：F – mcrB mrr hsdS20(rB –, mB –) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR ) xyl-5 λ – leu mtl-1 endA1+
規(guī)格及成分 成分 編號(hào) 十孔盒包裝
大腸桿菌 Stbl3 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 121112 0.1 mL×10
使用手冊(cè) 121112sc 1 份

運(yùn)輸及保存 干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑 目的 DNA、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等

使用方法

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插 入冰中）。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100 μL，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝 使用。 以下實(shí)驗(yàn)以 50 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。

2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量 的 DNA，質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），用手撥打 EP 管底或用移液器輕輕吹打混勻，冰上靜置 25 分鐘。

3. 42℃水浴熱擊 45 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低 轉(zhuǎn)化效率

。 4. 每個(gè)離心管中加入 450 μL 無(wú)菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）。

5. 30℃，225 rpm 復(fù)蘇 90 分鐘。（當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)， 30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤 重組的概率，若轉(zhuǎn)化 control PUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需 37℃，225 rpm 復(fù)蘇 60 分鐘。）

6. 5000 rpm 離心 1 分鐘收菌，留取 100 μL 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相 應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基上。

7. 平板倒置放于 30℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。（若轉(zhuǎn)化 control PUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需 37℃培養(yǎng)過(guò)夜）

注意：

1. 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板； 若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μL 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較 少，可通過(guò)離心（5,000 rpm，1 分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于 平板中。

2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 30℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩下的菌液再 涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。