大腸桿菌Rosetta(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是采用大腸桿菌 Origami B (DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可 用于 DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)本產(chǎn)品，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107。本感受態(tài)細(xì)胞 具有卡那霉素和四環(huán)素抗性。

菌株基因型為：F -ompT hsdSB(rB - mB - ) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR ,TetR )
規(guī)格及成分 成分 編號(hào) 包裝
本產(chǎn)品 121004 0.1 mL×10
使用手冊(cè) 1 份

運(yùn)輸及保存 干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑 目的 DNA、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等

使用方法

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100μL，可以根據(jù) 實(shí)際情況分裝使用。 以下實(shí)驗(yàn)以 50 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。

2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量 的 DNA，通常 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用移液器 輕輕吹打混勻，冰浴 30 分鐘。

3. 42℃熱擊 45 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘。

4. 每個(gè)離心管中加入 450 μL 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 搖床，150 rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘使菌體復(fù)蘇。

5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 固體 瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于 37℃直至液體被吸收， 倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。

注意：

1. 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板； 若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μL 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較 少，可通過離心（4,000 rpm，2 分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于 平板中。

2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再 涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。