大腸桿菌HB101化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品及特點(diǎn)HB101 菌株是 E.coli K12 菌株與 E.coli B 菌株的雜合產(chǎn)物（同時(shí)也是 Stbl3 的 原始菌株）。recA13 突變可有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率； 但不含核酸酶 endA1 突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑 盒中去蛋白液。hsdS20 背景使 HB101 缺失內(nèi)切酶系統(tǒng)，增強(qiáng)了外源 DNA 的穩(wěn)定性 和提取質(zhì)量。本產(chǎn)品是采用大腸桿菌 HB101 特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于 DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。本產(chǎn)品具有以下特點(diǎn)：

1. 具有鏈霉素抗性。

2. 基因型：F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR) glnV44λ-。

3. 不存在 lacIqZΔM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。

4. 該菌株遺傳性能穩(wěn)定，使用方便，適用于各種基因重組實(shí)驗(yàn)。 
規(guī)格及成分 成分 編號(hào) 小扁盒包裝
本產(chǎn)品 81221 0.1 mL×10
使用手冊(cè) 81221sc 1 份

運(yùn)輸及保存 干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑 目的 DNA、SOC 或 LB 培養(yǎng)基等 

使用方法

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100 μL，可以 根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。 以下實(shí)驗(yàn)以 50 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。

2. 待感受態(tài)細(xì)胞處于冰水混合狀態(tài)時(shí)，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA（根據(jù)實(shí) 際情況加入適量的 DNA，通常 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞能夠被 1 ng 超螺旋質(zhì)粒 DNA 所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴 25 分鐘。

3. 42℃熱擊 45 秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置 2-3 分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn) 化效率。

4. 每個(gè)離心管中加入 450 μL 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置 于 37℃搖床，200 rpm 振蕩培養(yǎng) 60 分鐘使菌體復(fù)蘇。

5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含有相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于 37℃倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。

注意事項(xiàng)：

1. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

2. 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布 平板；若轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可取 200-300 μL 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì) 的克隆數(shù)較少，可通過離心（5,000 rpm，1 分鐘）收菌后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮 菌體后將其涂布于平板中。

3. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于 37℃直至液體被吸收后再倒置培 養(yǎng)。

4. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液 再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。